Strukturní charakterizace regulační domény tyrozin hydroxylázy /
Tyrosin hydroxyláza katalyzuje přeměnu L-tyrosinu na L-DOPA a je klíčovým enzymem v biosyntéze dopaminu, noradrenalinu a adrenalinu. Její aktivita je regulována fosforylací na N-konci a interakcí s 14-3-3 proteiny. Za účelem využití NMR spektroskopie pro studium struktury regulační domény tyrosin hy...
Uloženo v:
| Hlavní autor: | |
|---|---|
| Další autoři: | |
| Typ dokumentu: | VŠ práce nebo rukopis |
| Jazyk: | Angličtina |
| Vydáno: |
2015
|
| Témata: | |
| On-line přístup: | http://is.muni.cz/th/409261/prif_b/ |
| Shrnutí: | Tyrosin hydroxyláza katalyzuje přeměnu L-tyrosinu na L-DOPA a je klíčovým enzymem v biosyntéze dopaminu, noradrenalinu a adrenalinu. Její aktivita je regulována fosforylací na N-konci a interakcí s 14-3-3 proteiny. Za účelem využití NMR spektroskopie pro studium struktury regulační domény tyrosin hydroxylázy a její interakci s 14-3-3 proteinem, byl připraven 15N/13C-značený protein ve vysoké čistotě a koncentraci. Tato bakalářská práce popisuje optimalizaci purifikační stategie pro dvojitě značenou regulační doménu lidské tyrosin hydroxylázy. Představuje použití thermal shift eseje pro optimalizaci podmínek purifikace, SDS-PAGE a MALDI MS pro kontrolu kvality vzorku a aplikaci HSQC experimentu jako kontroly sbalení vypurifikovaného proteinu. Tyrosine hydroxylase catalyzes hydroxylation of L-tyrosine to L-DOPA and it is a key enzyme in biosynthesis of dopamine, noradrenaline and adrenaline. Its activity is regulated by phosphorylation on its N-terminus and by interaction with 14-3-3 proteins. In order to apply NMR spectroscopy to study structural features of regulatory domain of tyrosine hydroxylase and its interactions with 14-3-3 protein, it was necessary to prepare 15N/13C-labeled protein in high purity and concentration. Herein presented bachelor thesis describes the optimization of the purification strategy for double labeled regulatory domain of human tyrosine hydroxylase. It reports the use of thermal shift assay for optimization of purification conditions, SDS-PAGE and MALDI MS for the control of quality of the sample and the application of HSQC experiment as the control of the folding of purified protein. |
|---|---|
| Popis jednotky: | Vedoucí práce: Jozef Hritz |
| Fyzický popis: | 55 listů : grafy |