Optimalizace Gibson assembly pro tvorbu polycistronních plasmidů určených k reprogramování somatických buněk do „medium spiny“ neuronů /
Tato diplomová práce se zaměřuje na vytvoření několika-genového DNA fragmentu ve formě lentivirového vektoru, který by mohl představovat nástroj umožňující transdiferenciaci astrocytů na neurony (konkrétně „medium spiny“ neurony). Následně by tohoto mohlo být využito při léčbě pacientů některých neu...
Uloženo v:
| Hlavní autor: | |
|---|---|
| Další autoři: | |
| Typ dokumentu: | VŠ práce nebo rukopis |
| Jazyk: | Angličtina |
| Vydáno: |
2014
|
| Témata: | |
| On-line přístup: | http://is.muni.cz/th/358524/prif_m/ |
| Shrnutí: | Tato diplomová práce se zaměřuje na vytvoření několika-genového DNA fragmentu ve formě lentivirového vektoru, který by mohl představovat nástroj umožňující transdiferenciaci astrocytů na neurony (konkrétně „medium spiny“ neurony). Následně by tohoto mohlo být využito při léčbě pacientů některých neurodegenerativních poruch spojených se ztrátou neuronů, například Huntingtonovy choroby. Teoretická část práce shrnuje různé metody spojování DNA fragmentů. Vzájemně je srovnává a popisuje jejich výhody a nevýhody. Praktická část pak využívá jednu z těchto metod, označovanou jako Gibson Assembly, která se jeví jako vhodná právě ke spojování několika delších DNA segmentů dohromady v rámci jediné izotermální reakce. První fáze experimentální části spočívala v optimalizaci PCR a docílení úspěšné a účinné amplifikace požadovaných genových fragmentů (s geny Mash1, Dlx2 a GFP), které mají být následně začleněny do vektoru, kterým byl plazmid pBOB. Následně byla provedena samotná Gibson Assembly, kt The diploma thesis focuses on the assembly of a multigene DNA construct in a form of a lentiviral vector, which could potentially be used as a tool for transdifferentiation of astrocytes into neurons (particularly the medium spiny neurons). This could then present a possible way of treating patients with some neurodegenerative diseases associated with loss of neurons, such as the Huntington’s disease. The theoretical part summarizes various methods of DNA assembly and compares their advantages and disadvantages. The practical part then utilizes one of them, referred to as the Gibson Assembly, which seems as a promising new way of assembling several longer DNA fragments together in a single isothermal reaction. First part of the experimentation involved PCR optimization and subsequent amplification of the desired gene fragments (genes Mash1, Dlx2 and GFP) to be connected and integrated in to the pBOB vector. Then, the actual Gibson Assembly was performed and optimized to obtain the desi |
|---|---|
| Popis jednotky: | Vedoucí práce: Vladimír Pekařík |
| Fyzický popis: | 93 stran : tabulky |