Exprese predikovaneho lektinu z Burkholderia cenocepacia pro strukturně-funkční studie
Burholderia cenocepacia je oportunitní patogenní bakterie, napadající pacienty s cystickou fibrózou. Tato bakterie je velkou hrozbou, kvůli její rezistenci na většinu antibiotik a některé desinfekční prostředky. Cystická fibróza je smrtelná nemoc, rozšířená po celém světě a objasnění patogenity bakt...
Uloženo v:
| Hlavní autor: | |
|---|---|
| Další autoři: | |
| Typ dokumentu: | VŠ práce nebo rukopis |
| Jazyk: | Čeština |
| Vydáno: |
2013
|
| Témata: | |
| On-line přístup: | http://is.muni.cz/th/326906/prif_b/ |
| Shrnutí: | Burholderia cenocepacia je oportunitní patogenní bakterie, napadající pacienty s cystickou fibrózou. Tato bakterie je velkou hrozbou, kvůli její rezistenci na většinu antibiotik a některé desinfekční prostředky. Cystická fibróza je smrtelná nemoc, rozšířená po celém světě a objasnění patogenity bakterie Burholderia cenocepacia by mohlo napomoct k léčbě této choroby. V genomu Burholderia cenocepacia, byl nalezen gen(bccll2), který kóduje protein, sekvenčně podobný některým rostlinným lektinům vázajícím manosu. Cílem této práce tedy bylo získání tohoto proteinu v rozpustné podobě. Hlavním krokem byla rekonstrukce rekombinantní molekuly. Jako vhodný vektor posloužil vektor pET28a-mal, jenž obsahoval gen malE, který zajistil správné sbalení výsledného proteinu. Ve vektoru se nacházela sekvence pro oligohistidinovou kotvu. Nejvhodnější, pro vpravení genu bccll2 do vektoru pET28s-mal, byla zvolena metoda topoklonování. Po úspěšném osekvenování klonu pETa-28-mal-bccll2 byl proveden test exp Burholderia cenocepacia is opportunistic human pathogen which infects patients with cystic fibrosis. This bacteria is resistant to most antibiotic and disinfectans and therefore is one of the most dangerous bacteria for patients with cystic fibrosis. Cystic fibrosis is fatal disease widespread worlwide and research of Burholderia cenocepacia could help to improve the treatment of this disease. In the genome of this bacteria there was found gene which encodes a protein similar to sequence mannose-binding plant lectins. The goal of this project was to obtain of fusion protein of BCCLL2 in soluble form. The vector of choice was pETa-28-mal containing the gene malE. The product of this gene, protein MBP is well known to enhance the folding of fusion proteins. Plasmid contained sequence coding HIS-tag. The TOPO-cloning method was used for insertion of bccll2 into vector pET28a-mal. Plasmid was verified by DNA sequencing. Tests of expression of different clones and with different concent |
|---|---|
| Popis jednotky: | Vedoucí práce: Michaela Wimmerová |
| Fyzický popis: | 46 l. : il. |