Separace a prekoncentrace peptidů a proteinů elektroforetickými metodami (Izoelektrická fokusace bez nosiče, = CAF-IEF, dvourozměrná CE, frakcionace)
Hmotnostní spektrometrie se stále více využívá při analýze složených proteomických vzorků. Před vlastním MS měřením je často nutné vzorek preparovat kvůli odstranění rušivých vlivů matrice a k zakoncentrování analytů. K těmto účelům lze využít metodu CAF-IEF. V této práci byla metoda CAF-IEF provede...
Uloženo v:
| Hlavní autor: | |
|---|---|
| Další autoři: | |
| Typ dokumentu: | VŠ práce nebo rukopis |
| Jazyk: | Čeština Angličtina |
| Vydáno: |
2011
|
| Témata: | |
| On-line přístup: | http://is.muni.cz/th/40829/prif_d/ |
| Shrnutí: | Hmotnostní spektrometrie se stále více využívá při analýze složených proteomických vzorků. Před vlastním MS měřením je často nutné vzorek preparovat kvůli odstranění rušivých vlivů matrice a k zakoncentrování analytů. K těmto účelům lze využít metodu CAF-IEF. V této práci byla metoda CAF-IEF provedena na komerčně dodávaném přístroji EA 101 (Villa Labeco, Slovensko), který byl vybaven speciálně vyrobenou kolonou pro dávkování větších objemů vzorků (až do 0,5 ml). K CAF-IEF byl navrhnut nový kontinuální mód, který nevyžaduje výměnu elektrolytu s přerušením průchodu proudu. V tomto módu byla provedena fokusace nízkomolekulárního pI markeru (PIM 7,4) a roztoku 0,016 mg/ml myoglobinu nebo inzulínu, po té byly odebrány 5 µl frakce k off-line analýze. Celkový čas fokusace byl 66 minut. Koncentraci PIMu 7,4 ve frakci se podařilo zvýšit až 75 krát (stanoveno pomocí UV VIS spectrometru). Koncentrace myoglobinu ve frakci se zvýšila až 33 krát a inzulínu 10 krát. Kvalitativní identifikace ... Mass spectrometry is being increasingly used for analysis of proteome complex samples. Sample preparation is often necessary to remove matrix interferences and to concentrate analytes prior to MS measurement. A useful method for this purpose is Carrier Ampholyte Free-Isoelectric Focusing (CAF-IEF). In this work CAF-IEF of ampholytes was performed on a commercial apparatus EA101 (Villa Labeco, Slovakia) equipped with a specially made column for samples of large volume (up to 0.5 mL). A new continuous mode without voltage interruption or electrolyte replacement was developed. In this mode, a low molecular mass pI marker (PIM 7.4) and low concentrations of myoglobin and insulin (0,016 mg/mL), respectively, were concentrated, and then 5-ul fractions collected for off-line analyses. The total time of focusing was 66 minutes. The concentration of PIM 7.4 in the fractions was increased up to 75 times (determined by UV-VIS spectrometry). The concentration in the fractions was increased up to ... |
|---|---|
| Popis jednotky: | Vedoucí práce: Jiří Pazourek |
| Fyzický popis: | 84 l. + 15 l. příl. |