Separace a prekoncentrace peptidů a proteinů elektroforetickými metodami (Izoelektrická fokusace bez nosiče, = CAF-IEF, dvourozměrná CE, frakcionace) - Budilová, Jana, 1981- (2011)
Hmotnostní spektrometrie se stále více využívá při analýze složených proteomických vzorků. Před vlastním MS měřením je často nutné vzorek preparovat kvůli odstranění rušivých vlivů matrice a k zakoncentrování analytů. K těmto účelům lze využít metodu CAF-IEF. V této práci byla metoda CAF-IEF provedena na komerčně dodávaném přístroji EA 101 (Villa Labeco, Slovensko), který byl vybaven speciálně vyrobenou kolonou pro dávkování větších objemů vzorků (až do 0,5 ml). K CAF-IEF byl navrhnut nový kontinuální mód, který nevyžaduje výměnu elektrolytu s přerušením průchodu proudu. V tomto módu byla provedena fokusace nízkomolekulárního pI markeru (PIM 7,4) a roztoku 0,016 mg/ml myoglobinu nebo inzulínu, po té byly odebrány 5 µl frakce k off-line analýze. Celkový čas fokusace byl 66 minut. Koncentraci PIMu 7,4 ve frakci se podařilo zvýšit až 75 krát (stanoveno pomocí UV VIS spectrometru). Koncentrace myoglobinu ve frakci se zvýšila až 33 krát a inzulínu 10 krát. Kvalitativní identifikace ...