Analytické přístupy ve výzkumu a vývoji proteinů zapojených v cytokininovém hormonálním systému rostlin /
Předkládaná disertační práce je souborem experimentálních výsledků vztahujících se primárně ke dvěma vybraným proteinům, které jsou zapojeny v cytokininovém metabolismu a signalizaci u rostlin. Prvním ze studovaných proteinů je enzym β-D-glukosidasa. V rámci výzkumu specificity tohoto enzymu byla pu...
Uloženo v:
| Hlavní autor: | |
|---|---|
| Další autoři: | |
| Typ dokumentu: | VŠ práce nebo rukopis |
| Jazyk: | Čeština |
| Vydáno: |
2017
|
| Témata: | |
| On-line přístup: | http://is.muni.cz/th/327898/prif_d/ |
| Shrnutí: | Předkládaná disertační práce je souborem experimentálních výsledků vztahujících se primárně ke dvěma vybraným proteinům, které jsou zapojeny v cytokininovém metabolismu a signalizaci u rostlin. Prvním ze studovaných proteinů je enzym β-D-glukosidasa. V rámci výzkumu specificity tohoto enzymu byla publikována studie efektivity saturační mutageneze vybrané pozice W373. Součástí této publikace byla také purifikace mutantních forem enzymu, získaných jako rekombinantní proteiny cestou heterologní genové exprese v E. coli a určení počáteční rychlosti katalýzy vytvořených mutantů enzymu za použití umělého i přirozeného substrátu. β-D-glukosidasa se stala modelovým enzymem pro vytvoření automatizovaného postupu pro měření enzymové kinetiky, a to za použití jak přirozených, tak umělých substrátů. Měření enzymové kinetiky za použití umělého substrátu je založeno na kvantifikaci aglykonu vznikajícího při enzymatické reakci. Při měření kinetiky za použití přirozeného substrátu je kvantitativně sta This dissertation is a set of experimental results related to two selected proteins that are involved in cytokinin metabolism and signaling in plants. The first protein is a β-D-glucosidase. During the determination of the specificity of this enzyme, an efficiency analysis of saturation mutagenesis in the pre-selected W373 position was published. This publication also included a protocol for the purification of mutant forms of the enzyme as recombinant proteins using heterologous gene expression in E. coli. Initial velocities of the created mutants were measured using artificial and natural substrates. β-D-glucosidase was developed as model enzyme to create an automated measurement procedure for enzyme kinetics using both natural and artificial substrates. Measurement of enzyme kinetics using an artificial substrate is based on the quantification of the aglycone formed during the enzymatic reaction. The second product of the enzymatic reaction, β D glucopyranose, was used to quantitati |
|---|---|
| Popis jednotky: | Vedoucí práce: Břetislav Brzobohatý |
| Fyzický popis: | 83 listů, 8 listů příloh |