Analytické přístupy ve výzkumu a vývoji proteinů zapojených v cytokininovém hormonálním systému rostlin - Klimeš, Pavel (2017)
Předkládaná disertační práce je souborem experimentálních výsledků vztahujících se primárně ke dvěma vybraným proteinům, které jsou zapojeny v cytokininovém metabolismu a signalizaci u rostlin. Prvním ze studovaných proteinů je enzym β-D-glukosidasa. V rámci výzkumu specificity tohoto enzymu byla publikována studie efektivity saturační mutageneze vybrané pozice W373. Součástí této publikace byla také purifikace mutantních forem enzymu, získaných jako rekombinantní proteiny cestou heterologní genové exprese v E. coli a určení počáteční rychlosti katalýzy vytvořených mutantů enzymu za použití umělého i přirozeného substrátu. β-D-glukosidasa se stala modelovým enzymem pro vytvoření automatizovaného postupu pro měření enzymové kinetiky, a to za použití jak přirozených, tak umělých substrátů. Měření enzymové kinetiky za použití umělého substrátu je založeno na kvantifikaci aglykonu vznikajícího při enzymatické reakci. Při měření kinetiky za použití přirozeného substrátu je kvantitativně sta