Konstrukce rekombinantních DNA sond pro použití v molekulární cytogenetice
Příprava sond pro fluorescenční in situ hybridizaci zahrnuje širokou škálu technik molekulární biologie. V našem případě byla první metodou Laserová mikrodisekce (LCM), pomocí níž jsme získali genetický materiál - chromosomy či jejich části, jež byly oblastí našeho zájmu. Pracovali jsme s chromosomy...
Uloženo v:
| Hlavní autor: | |
|---|---|
| Další autoři: | |
| Typ dokumentu: | VŠ práce nebo rukopis |
| Jazyk: | Čeština |
| Vydáno: |
2014
|
| Témata: | |
| On-line přístup: | http://is.muni.cz/th/21590/prif_d/ |
| Shrnutí: | Příprava sond pro fluorescenční in situ hybridizaci zahrnuje širokou škálu technik molekulární biologie. V našem případě byla první metodou Laserová mikrodisekce (LCM), pomocí níž jsme získali genetický materiál - chromosomy či jejich části, jež byly oblastí našeho zájmu. Pracovali jsme s chromosomy vybraných zástupců čeledi Bovidae (Turovití), což je velmi početná čeleď podřádu přežvýkavců. Někteří zástupci patří ke kriticky ohroženým druhům a jejich sekvence DNA jsou v genových bankách zastoupeny velmi vzácně. Laserovou mikrodisekcí jsme získali v průměru 10 kopií chromosomu nebo jeho části. Z důvodu malého množství materiálu, následovala technika DOP PCR, kterou jsme využili k namnožení mikrodisekované DNA. PCR produkty byly klonovány do pDrive cloning vektoru, s využitím Blue-white assaye (modro-bílý test) pro selekci pozitivních klonů. Následovala DOT BLOT analýza, díky níž byla provedena selekce specifických klonů, které byly podrobeny sekvenační analýze a následně značeny fluoro Probe preparation for fluorescent in situ hybridization includes large scale of molecular biology techniques. The first method in our case was Laser Capture Microdissection (LCM). We applied LCM to obtain genetic material - whole chromosomes and their parts that were in focus of our study. We worked with chromosomes of selected members of family Bovidae, it´s large family of suborder Ruminantia. Some Bovidae members are critically endangered species and their DNA sequences are represented in gene banks rarely. We got 10 copies of chromosome (or part of chromosome) by laser microdissection in average. Due to small amount of material we applied DOP PCR technique to amplify microdissected DNA. PCR products were cloned into pDrive cloning vector with use of Blue-white assaye for positive clone selection. It was followed by a DOT BLOT analysis, which was used for specific clone selection. Subsequently, these clones were processed by sequence analysis and then labelled by fluorochromes or ha |
|---|---|
| Popis jednotky: | Vedoucí práce: Jiří Rubeš Experimentální část práce je tvořena pěti separátními studiemi |
| Fyzický popis: | 129 l. |