Metody purifikace histonů z lidských tkáňových kultur
Dynamické posttranslační modifikace (PTM) histonů vyskytující se především na N-terminálních oblastech histonového řetězce jsou důležitou ale ne zcela objasněnou součástí regulace genů, epigenetické dědičnosti, integrity genomu a jiných jaderných mechanismů. Podmínkou pro sledování kombinace četných...
Uloženo v:
| Hlavní autor: | |
|---|---|
| Další autoři: | |
| Typ dokumentu: | VŠ práce nebo rukopis |
| Jazyk: | Čeština |
| Vydáno: |
2014
|
| Témata: | |
| On-line přístup: | http://is.muni.cz/th/393319/prif_b/ |
| Shrnutí: | Dynamické posttranslační modifikace (PTM) histonů vyskytující se především na N-terminálních oblastech histonového řetězce jsou důležitou ale ne zcela objasněnou součástí regulace genů, epigenetické dědičnosti, integrity genomu a jiných jaderných mechanismů. Podmínkou pro sledování kombinace četných histonových modifikací vyskytujících se v určitém biologickém stavu buňky je použití izolačních metod, při kterých nedojde ke ztrátě PTM. Tato bakalářská práce se věnuje metodám purifikace histonů z lidských tkáňových kultur. Při nejpoužívanější metodě izolace histonů, kyselé extrakci z chromatinu, může docházet ke ztrátě některých modifikací, např. fosforylací na určitých pozicích. Praktická část se z tohoto důvodu věnuje novému postupu metody s použitím močoviny a soli, při kterém by měly být labilnější modifikace lépe chráněny. Kromě vyhodnocení úspěšnosti izolace a purifikace histonů, byl porovnán fosforylační stav histonů s histonovými extrakty izolovanými metodou kyselé extrakce Dynamic post-translational modifications (PTMs) of the histones occur predominantly at the N-terminal regions of histone chains. They are important but not completely understood components of gene regulation, epigenetic inheritance, genome integrity and other nuclear mechanisms. The requirement for monitoring a combination of numerous modifications of histones occurring at a certain biological state of the cell is using isolation techniques in which loss of PTMs is suppressed. This bachelor thesis deals with methods of purification of histones from human tissue cultures. During the most widely used method, the acid extraction from chromatin, some modifications may be lost, such as phosphorylation at certain positions. For this reason the practical part of the thesis deals with the new salt-urea method, in which labile modifications should be better protected. The success of isolation and purification of histones was evaluated as well as the comparison of histone phosphorylation s |
|---|---|
| Popis jednotky: | Vedoucí práce: Gabriela Lochmanová |
| Fyzický popis: | 46 l. : il. |