Detekce komplexů DNA s nádorově supresorovými proteiny
Proteiny p53 a BRCA1 jsou důležité nádorové supresorové proteiny, které hrají zásadní roli v ochraně buňky, zajišťují genomovou stabilitu a podporují přežití buňky. Mutace v genech těchto proteinů jsou spojeny se vznikem různých typů nádorových onemocnění, u BRCA1 proteinu to je zejména rakovina prs...
Uloženo v:
| Hlavní autor: | |
|---|---|
| Další autoři: | |
| Typ dokumentu: | VŠ práce nebo rukopis |
| Jazyk: | Čeština |
| Vydáno: |
2013
|
| Témata: | |
| On-line přístup: | http://is.muni.cz/th/324032/prif_m/ |
| Shrnutí: | Proteiny p53 a BRCA1 jsou důležité nádorové supresorové proteiny, které hrají zásadní roli v ochraně buňky, zajišťují genomovou stabilitu a podporují přežití buňky. Mutace v genech těchto proteinů jsou spojeny se vznikem různých typů nádorových onemocnění, u BRCA1 proteinu to je zejména rakovina prsu a vaječníků. Jejich důležitou vlastností je vazba na DNA, díky které mohou plnit své funkce. V této diplomové práci jsem se proto zaměřila na sledování vlivu dvojmocných iontů kovů (Mn2+, Mg2+, Ca2+, Zn2+ a Ni2+) na tvorbu komplexů těchto proteinů s DNA pomocí metody gelové retardační analýzy. Pro testování vazby p53 byl vybrán mutantní protein p53 (fl) N268D, u něhož jsme sledovali tvorbu komplexů jak se superhelikálním pBluesriptem, tak s fragmenty plazmidu pPGM2. U BRCA1 proteinu byly vybrány dva konstrukty centrální domény (BRCA1-L a BRCA1-B), u kterých byla testována vazba se superhelikálním pBluescriptem. Druhou použitou metodou byla mikroskopie atomárních sil, pomocí které se nám po Proteins p53 and BRCA1 are important tumour suppressor proteins, which play an essential role in the cell protection, provide genomic stability and promote cell survival. Mutations in genes related to these proteins are associated with a development of various types of cancer, for BRCA1 typically it is the breast and the ovarian cancer. Their important function is the binding to DNA, which enables them fulfilling of their role in the system. In this thesis I focused on the effect of divalent metal ions (Mn2+, Mg2+, Ca2+, Zn2+ a Ni2+) on the formation of protein-DNA complexes using electrophoretic mobility shift assay. For the binding experiments the mutant p53 (fl) N268D was selected, where we studied the formation of complexes with supercoiled pBluescript or with the fragments of plasmid pPGM2. In the BRCA1 protein two constructs of the central domains (BRCA1-L and the BRCA1-B) were selected. These were further tested for binding properties towards supercoiled pBluescript. The sec |
|---|---|
| Popis jednotky: | Vedoucí práce: Václav Brázda |
| Fyzický popis: | 83 l. : il. |