Exprese a charakterizace proteinu AFL3 z Aspergillus fumigatus
V předchozích výzkumech bylo na našem pracovišti nalezeno 10 lektinům podobných proteinů Aspergillus fumigatus a po provedení bioinformatických studií byl vybrán předpokládaný lektin AFL3, který je kódovaný genem afl3. Tento gen byl již dříve na našem pracovišti naklonován do plasmidu a vložen do bu...
Uloženo v:
| Hlavní autor: | |
|---|---|
| Další autoři: | |
| Typ dokumentu: | VŠ práce nebo rukopis |
| Jazyk: | Čeština |
| Vydáno: |
2010
|
| Témata: | |
| On-line přístup: | http://is.muni.cz/th/269276/prif_b/ |
| Shrnutí: | V předchozích výzkumech bylo na našem pracovišti nalezeno 10 lektinům podobných proteinů Aspergillus fumigatus a po provedení bioinformatických studií byl vybrán předpokládaný lektin AFL3, který je kódovaný genem afl3. Tento gen byl již dříve na našem pracovišti naklonován do plasmidu a vložen do buněk Escherichia coli. Cílem bakalářské práce bylo pokusit se tento rekombinantní protein izolovat. Pracováno bylo tedy s buňkami Escherichia coli kmene BL21(DE3)/RIPL-pRSET-afl3 a BL21(DE3)/pLysS-pRSET-afl3. Prvním experimentem byl potvrzen fakt, že protein není exprimován v periplasmě a další experimenty se zabývaly izolací proteinu z média. Byly optimalizovány podmínky kultivace, nejlepších výsledků bylo dosaženo při pěstování kultury při 30°C přes noc. Na základě nízké detekovatelnosti našeho proteinu ve vzorku bylo zvoleno zakoncentrování médií, což se nejprve zdálo být vhodným postupem, při dalších experimentech bylo však dosaženo spíše neuspokojivých výsledků. Byly testovány různé ... 10 lectin-similar-proteins of Aspergillus fumigatus were previously discovered pursuant to a sequence homology. A formerly undescribed putative lectin AFL3 (encoded by the afl3 gene) was chosen. A DNA fragment containing afl3 was previously inserted into a cloning plasmid and a genetic transformation in the Escherichia coli was performed at our institute. The aim of this work was a possible reach up to a protein isolation. BL21(DE3)/RIPL-pRSET-afl3 and BL21(DE3)/pLysS-pRSET-afl3 were the two strains employed in the tests. The very first experiment - a simple way to prove the periplasmic localization of the protein - displayed the AFL3 absence in the periplasm. Consequently, a variety of media were used and optimized to provide a maximum quantity of the expressed protein. The optimum cultivation temperature should not exceed 30°C, the over-night growth was considered to be optimal. Due to the low protein production and only a little chance of detection, a media thickening was proposed ... |
|---|---|
| Popis jednotky: | Vedoucí práce: Michaela Wimmerová |
| Fyzický popis: | 66 l. |