Exprese a charakterizace proteinu AFL3 z Aspergillus fumigatus - Hýblová, Lenka (2010)
V předchozích výzkumech bylo na našem pracovišti nalezeno 10 lektinům podobných proteinů Aspergillus fumigatus a po provedení bioinformatických studií byl vybrán předpokládaný lektin AFL3, který je kódovaný genem afl3. Tento gen byl již dříve na našem pracovišti naklonován do plasmidu a vložen do buněk Escherichia coli. Cílem bakalářské práce bylo pokusit se tento rekombinantní protein izolovat. Pracováno bylo tedy s buňkami Escherichia coli kmene BL21(DE3)/RIPL-pRSET-afl3 a BL21(DE3)/pLysS-pRSET-afl3. Prvním experimentem byl potvrzen fakt, že protein není exprimován v periplasmě a další experimenty se zabývaly izolací proteinu z média. Byly optimalizovány podmínky kultivace, nejlepších výsledků bylo dosaženo při pěstování kultury při 30°C přes noc. Na základě nízké detekovatelnosti našeho proteinu ve vzorku bylo zvoleno zakoncentrování médií, což se nejprve zdálo být vhodným postupem, při dalších experimentech bylo však dosaženo spíše neuspokojivých výsledků. Byly testovány různé ...