Fenoloxidázová kaskáda u hmyzu /
Metoda spektrofotometrického stanovení aktivity enzymu fenoloxidázy (PO) s použitím 3,4-dihydroxyfenylalaninu (DOPA) jako substrátu byla optimalizována pro detekci enzymatické aktivity v plazmatické frakci hemolymfy zavíječe voskového Galleria mellonella. Touto metodou lze stanovit okamžitou, spontá...
Uloženo v:
| Hlavní autor: | |
|---|---|
| Další autoři: | |
| Typ dokumentu: | VŠ práce nebo rukopis |
| Jazyk: | Čeština |
| Vydáno: |
2009
|
| Témata: | |
| On-line přístup: | http://is.muni.cz/th/150960/prif_m/ |
| Shrnutí: | Metoda spektrofotometrického stanovení aktivity enzymu fenoloxidázy (PO) s použitím 3,4-dihydroxyfenylalaninu (DOPA) jako substrátu byla optimalizována pro detekci enzymatické aktivity v plazmatické frakci hemolymfy zavíječe voskového Galleria mellonella. Touto metodou lze stanovit okamžitou, spontánně aktivovanou a po chemické aktivaci profenoloxidázy (pPO) prostřednictvím metanolu i celkovou hladinu PO v hemolymfě. Největší vliv na vlastní stanovení mají teplota a délka inkubace, které výrazně ovlivňují hladinu aktivního enzymu. Celková neboli pPO aktivita je podobnými faktory ovlivňována podstatně méně. Potvrzena byla také aktivace fenoloxidázové kaskády v odpovědi na působení vybraných elicitorů - zymosanu A a lipopolysacharidu. Pomocí inhibitorů biosyntézy eikosanoidů (IBE) indomethacinu a phenidonu byl prokázán vliv eikosanoidů na fenoloxidázovou kaskádu. Pro měření PO a pPO aktivity byl použit modifikovaný protokol vytvořený na základě výsledků optimalizací. Po aplikaci indom. The spectrophotometric determination of phenoloxidase (PO) activity using 3,4-dihydroxyphenylalanin (DOPA) as substrate was optimized for detection of enzymatic activity in hemolymph plasma fraction of greater wax moth Galleria mellonella. This method can be used for determination of immediate, spontaneously activated and also total level of PO in hemolymph. Total PO activity can be measured after chemical activation of inactive prophenoloxidase (pPO) by organic solvent methanol. Temperature and incubation time are the main factors affecting this PO assay, because both of them can influence the level of active enzyme. Total PO level otherwise pPO activity is affected by these factors to a significantly lesser extent. The activation of phenoloxidase system in response to the selected elicitors - zymosan A and lipopolysaccharide was also confirmed. Using eicosanoid biosynthesis inhibitors (EBI) indomethacin and phenidone, the influence of eicosanoids on phenoloxidase system was proved. |
|---|---|
| Popis jednotky: | Vedoucí práce: Pavel Hyršl |
| Fyzický popis: | 66 listů, 22 listů příloh : ilustrace |