Detekce ATP v bakterii Acidithiobacillus ferroxidans oxidující Fe(II)
Práce se zabývá aplikací luminiscenčního stanovení ATP v bakterii Acidithiobacillus ferrooxidans oxidující Fe(II). Použitý komerční kit na stanovení ATP byl testován na řadě mikroorganismů, ne však na acidofilních chemolitotrofních bakteriích, které byly předmětem práce. V našem případě docházelo k...
Uloženo v:
| Hlavní autor: | |
|---|---|
| Další autoři: | |
| Typ dokumentu: | VŠ práce nebo rukopis |
| Jazyk: | Čeština |
| Vydáno: |
2008.
|
| Témata: | |
| On-line přístup: | http://is.muni.cz/th/77645/prif_m/ |
| Shrnutí: | Práce se zabývá aplikací luminiscenčního stanovení ATP v bakterii Acidithiobacillus ferrooxidans oxidující Fe(II). Použitý komerční kit na stanovení ATP byl testován na řadě mikroorganismů, ne však na acidofilních chemolitotrofních bakteriích, které byly předmětem práce. V našem případě docházelo k inhibici luciferasy způsobené aciditou a železem(III) přítomným v bakteriálním vzorku. Ačkoli instrukce kitu zaručují dostatečnou pufrační kapacitu, bylo nutné vzorek vhodně ředit. Tento krok eliminoval také inhibici železem(III). Zásadním rozporem s metodickým doporučením se ukázalo být množství přídavku standardu ATP. Náš postup poskytuje dobrou citlivost luminiscence pro standard ATP pro různé koncentrace buněk ve vzorku. Měření ukázala korelaci růstu buněk, oxidace Fe(II) a tvorby ATP. Množství ATP obsažené v jedné buňce odpovídá obecným hodnotám pro bakterie, avšak závisí na fyziologickém stavu bakterie. Část práce se zabývá kinetikou bakteriální oxidace síry za vyšších teplot. Na zákl. Thesis is related to application of bioluminescence on ATP assay in iron-oxidizing Acidithiobacillus ferrooxidans. A commercial ATP kit was used which has been tested for ATP determination in various microorganisms. Under our conditions, luciferase was inhibited due to acidity and iron which were present in bacterial samples. Although a kit instruction assume a sufficient buffer capability, a suitable sample dilution was necessary. This procedure also eliminated inhibition by iron. Another disagreement with the kit instruction was related to use of an ATP standard for ATP determination per one cell. In contrast to those instructions, our procedure provided a good sensitivity of bioluminescence related to the ATP standard under different cell concentration in the sample. We indicated a correlation of growth, iron oxidation and ATP formation in batch cultures. The ATP content in one cell corresponded to general values in other bacteria although this content was dependent on physiological. |
|---|---|
| Popis jednotky: | Vedoucí práce: Martin Mandl. |
| Fyzický popis: | 64 l. : il., obr. |