Analýza molekulárních mechanismů podmiňujících reakci lidských embryonálních kmenových buněk na poškození DNA
V somatických buňkách jsou v průběhu buněčného cyklu strategicky rozmístěny kontrolní body, které zajišťují integritu genomu. Regulace kontrolních bodů a buněčného cyklu v embryonálních kmenových buňkách se liší od regulace v diferencovaných somatických buňkách. Cílem této studie bylo zjistit, zda h...
Uloženo v:
| Hlavní autor: | |
|---|---|
| Další autoři: | |
| Typ dokumentu: | VŠ práce nebo rukopis |
| Jazyk: | Čeština |
| Vydáno: |
2008
|
| Témata: | |
| On-line přístup: | http://is.muni.cz/th/106061/prif_m/ |
| Shrnutí: | V somatických buňkách jsou v průběhu buněčného cyklu strategicky rozmístěny kontrolní body, které zajišťují integritu genomu. Regulace kontrolních bodů a buněčného cyklu v embryonálních kmenových buňkách se liší od regulace v diferencovaných somatických buňkách. Cílem této studie bylo zjistit, zda hES buňky obsahují molekulární komponenty zapojené do ATM/ATR signalizace a zda mají plně vyvinuty a funkční G1/S a G2/M kontrolní body. V této studii jsem stanovil efekt různých dávek UVC záření na hES buňky. Zjistil jsem, že poškození DNA v G1 fázi způsobuje akumulaci hES buněk v G1/S fázi buněčného cyklu, což naznačuje přítomnost G1/S kontrolního bodu. CDK2 a její aktivační fosfatáza Cdc25A jsou klíčové molekuly, které jsou odpovědné za blok v G1/S kontrolním bodu. Při poškození DNA (UVC ≥ 1.5 J/m2) dochází k rychlé degradaci Cdc25A a snížení aktivity CDK2 i CDK1. Western blottingová analýza ukázala, že krátkodobě in vitro propagované hES buňky jsou náchylnější k UVC záření a aktivují apo. In somatic cells the checkpoint pathways are strategically placed to protect the genom integrity. Cell cycle regulatory pathways in early embryos differ significantly from those in differentiated somatic cells. The aim of this study was to determine whether hESC contain molecular components involved in ATM/ATR signaling pathways and also whether their G1/S and/or G2/M checkpoints are developed and fully functional. As the regulation of ATM/ATR pathways is dependent on the type and the extent of DNA damage, here I studied the effect of different doses of UVC irradiation on hESC. I found that DNA damage in early G1 phase causes cell cycle arrest of hES cells in G1/S phase, suggesting the presence of G1/S checkpoint pathway. CDK2 and its upstream regulatory molecule Cdc25A are the crucial molecules that drive cell through G1/S transition. I found that Cdc25A phosphatase becomes degraded and activity of CDK2 is lowered at doses of UVC ≥ 1.5 J/m2. Moreover, western blot analysis showed that. |
|---|---|
| Popis jednotky: | Vedoucí práce: Aleš Hampl. |
| Fyzický popis: | 57 l. : il. |