Separace a modifikace (fragmentace) bakteriálních nukleových kyselin s využitím nových typů nosičů
Byl optimalizován postup izolace bakteriální DNA z buněk rodu Lactobacillus. Optimální koncentrace chloridu sodného pro izolaci DNA pomocí vysolování byla 1,10 - 1,65 M. Testovanou metodou byla izolována DNA v kvalitě vhodné pro PCR. Při izolaci DNA z mléčných výrobků pomocí vysolování nebyl testova...
Uloženo v:
| Hlavní autor: | |
|---|---|
| Další autoři: | |
| Typ dokumentu: | VŠ práce nebo rukopis |
| Jazyk: | Čeština |
| Vydáno: |
2007
|
| Témata: | |
| On-line přístup: | http://is.muni.cz/th/68508/prif_m/ |
| Shrnutí: | Byl optimalizován postup izolace bakteriální DNA z buněk rodu Lactobacillus. Optimální koncentrace chloridu sodného pro izolaci DNA pomocí vysolování byla 1,10 - 1,65 M. Testovanou metodou byla izolována DNA v kvalitě vhodné pro PCR. Při izolaci DNA z mléčných výrobků pomocí vysolování nebyl testovanou metodou vliv inhibitorů PCR eliminován. Postup je vhodný pro izolaci a následnou amplifikaci DNA z čistých bakteriálních kultur. Oba typy nosičů aktivované vybraným lanthanoidovým iontem (Eu3+) linearizovaly plazmidovou DNA pBR322 při 76 stupňů Celsia. Aktivovaný nosič Chelex 100 štěpil plazmidovou DNA pBR322 rychleji než aktivovaný nosič P(HEMA-co-GMA). Na základě uvedených výsledků nelze učinit jednoznačný závěr, zda se u daných kmenů rodu Lactobacillus jedná o plazmidovou DNA. Štěpení pomocí nosičů P(HEMA-co-GMA) a Chelex 100 aktivovaných iontem Eu3+ nepotvrdilo, že společně s bakteriální DNA byla izolována i plazmidová DNA. We have optimalised salting-out method for DNA isolation from Lactobacillus bacterial cells. Optimal concentration of NaCl is about 1,10 - 1,65 M. With this method we isolate DNA in quality suitable for PCR. Isolation DNA by salting-out method from milk products does not eliminate PCR inhibitors. This method is suitable for DNA isolation from pure cultures of bacterial cells. Both types of Eu3+ activated carriers cleave plasmid DNA pBR322 at 76 Celsium degrees . Chelex 100 cleave faster than P(HEMA-co-GMA). Because of our outcome of experiments we do not have to say that the extrachromosomal DNA of Lactobacillus strains is plasmid. DNA cleavage by P(HEMA-co-GMA) a Chelex 100 aktivated carriers do not verify that we isolate chromosomal and plasmid DNA. |
|---|---|
| Popis jednotky: | Vedoucí práce: Bohuslav Rittich |
| Fyzický popis: | 62 s., [4] l. příl. |