Vliv superhelicity a lokálních otevřených struktur na interakci nádorového supresoru p53 s DNA
Smyslem naší práce bylo navázat na predchozí studium interakcí proteinu p53 s lokálními otevrenými strukturami, které zapocalo studiem vazby centrální domény na krížovou strukturu v plazmidu s vloženou sekvencí (AT)34 elektronovou mikroskopií a silovou rastrovací mikroskopií (Cherny aj., 1999; Jett...
Uloženo v:
| Hlavní autor: | |
|---|---|
| Další autoři: | |
| Typ dokumentu: | VŠ práce nebo rukopis |
| Jazyk: | Čeština |
| Vydáno: |
2007.
|
| Témata: | |
| On-line přístup: | http://is.muni.cz/th/63735/prif_m/ |
| Shrnutí: | Smyslem naší práce bylo navázat na predchozí studium interakcí proteinu p53 s lokálními otevrenými strukturami, které zapocalo studiem vazby centrální domény na krížovou strukturu v plazmidu s vloženou sekvencí (AT)34 elektronovou mikroskopií a silovou rastrovací mikroskopií (Cherny aj., 1999; Jett aj., 2000) a výzkumem interakce standardního a mutantního proteinu p53 s triplexem DNA. Vybrali jsme si ke studiu triplex typu TAT, protože podmínky jeho vzniku jsou blízké podmínkám fyziologickým 25 - 37C, pH 8, 1mM MgCl2. V této práci byla objevena strukturne specifická vazba proteinu wtp53 a mutantního proteinu G245S na intermolekulární triplex (dT)50.(dA)50.(dT)50. Intermolekulární triplex byl tvoren oligonukleotidy pri výše zmínených podmínkách a vazba byla studována pomocí radioaktivní EMSA. Dále byla zkoumána vazba proteinu wtp53 na plazmidovou DNA se sekvencí tvorící triplex - pUC19/T69 pomocí retardacní analýzy v agarózovém gelu. Tvorba triplexu v tomto plazmidu byla ukázána jako ve. The aim of my diploma work was to continue in previous research of protein p53 interaction with local open structures that started with research of core domain binding to cruciform in plasmid with insert sequence (AT)34 by electron microscopy and scanning force microscopy (Cherny et al., 1999; Jett et al., 2000) and by research of interaction of wild and mutant protein p53 types with triplex DNA. We chose triplex TAT for the research, because triplex-forming conditions are close to physiological conditions (25 - 37C, pH 8, 1mM MgCl2). In this diploma work was discovered a structure-selective DNA binding of protein wtp53 and mutant G245S on the intermolecular triplex (dT)50.(dA)50.(dT)50. Intermolecular triplex was prepared from oligonucleotides under the conditions mentioned above and binding of protein p53 was examined by a radioactive EMSA. It was also examined binding of wild-type protein p53 on plasmid DNA containing triplex-forming sequence - pUC19/T69 with retardation analysis i. |
|---|---|
| Popis jednotky: | Vedoucí práce: Marie Brázdová. |
| Fyzický popis: | 72 l. : il. |