Expresia proteínov so selektívnym izotopovým značením

Selektívne izotopové značenie proteínov nám poskytuje výhodu oproti experimentom s uniformným značením najmä vo výsledku NMR spektroskopie, keď dostávame viac rozlíšené spektrá. V práci sme sa zamerali na vysvetlenie expresie plazmidov u bakteriálneho kmeňa Escherichia coli a možnosti využitia klono...

Celý popis

Uloženo v:
Podrobná bibliografie
Hlavní autor: Garajová, Katarína (Autor práce)
Další autoři: Žídek, Lukáš, 1968- (Vedoucí práce)
Typ dokumentu: VŠ práce nebo rukopis
Jazyk:Slovenština
Vydáno: 2011
Témata:
On-line přístup:http://is.muni.cz/th/324147/prif_b/
Obálka
Popis
Shrnutí:Selektívne izotopové značenie proteínov nám poskytuje výhodu oproti experimentom s uniformným značením najmä vo výsledku NMR spektroskopie, keď dostávame viac rozlíšené spektrá. V práci sme sa zamerali na vysvetlenie expresie plazmidov u bakteriálneho kmeňa Escherichia coli a možnosti využitia klonovacích vektorov vo forme expresných plazmidov pre produkciu proteínu, ktorý nie je nami zvolenému organizmu vlastný. Predstavujeme spôsob selektívneho značenia aminokyselín, ktorý nevyžaduje využitie auxotrofného kmeňa. Ovplyvnením metabolizmu zvolenej aminokyseliny inhibíciou produktom jej ústrednej premeny sme úspešne pripravili vzorky prijímačovej domény proteínu CKI1 pre štruktúrne analýzy NMR spektroskopiou. Proteín CKI1 zaraďujeme do rodiny AHK histidínkinázových homológov, ktoré sa uplatňujú v cytokinínových signálnych dráhach u rastlín, kde ovplyvňujú mnohé procesy v rastlinách, napríklad starnutie listov či odpoveď na stresujúce podnety z okolia.
Selective isotope labeling gives us an advantage against uniform labeling experiments: The most significant difference is in resolution of results of NMR spectroscopy. In the thesis, we study plasmid expression in the bacterium Escherichia coli and its exploitation in cloning to express a protein which is not familiar to bacteria. We present an experimental protocol for selective isotope labeling in which using of an auxotrofic strain is not required. We prepared a sample of the receiver domain of CKI1 protein, used for NMR spectroscopy, by manipulating metabolism pathways of amino acid we had chosen. Protein CKI1 belongs to the AHK family of histidine kinases, which is implicated in cytokinine signaling pathways in plants. They perform important roles in many processes, e.g. in leaf senescence or in responding to stress signals from environment.
Popis jednotky:Vedoucí práce: Lukáš Žídek
Fyzický popis:v, 28 l. : il.