Rusticyanin bakterie Acidithiobacillus ferrooxidans
Bakterie Acidithiobacillus ferrooxidans je kosmopolitní acidofilní bakterie způsobující okyselení okolního prostření. Hojně je využívána v biohydrometalurgii, při získávání kovů z rud. Ve svém dýchacím řetězci obsahuje protein rusticyanin, který zprostředkovává přenos elektronů pocházejících z oxida...
Uloženo v:
| Hlavní autor: | |
|---|---|
| Další autoři: | |
| Typ dokumentu: | VŠ práce nebo rukopis |
| Jazyk: | Čeština |
| Vydáno: |
2011
|
| Témata: | |
| On-line přístup: | http://is.muni.cz/th/211525/prif_m/ |
| Shrnutí: | Bakterie Acidithiobacillus ferrooxidans je kosmopolitní acidofilní bakterie způsobující okyselení okolního prostření. Hojně je využívána v biohydrometalurgii, při získávání kovů z rud. Ve svém dýchacím řetězci obsahuje protein rusticyanin, který zprostředkovává přenos elektronů pocházejících z oxidace Fe2+ iontů. Diplomová práce se zabývala přípravou rekombinantního proteinu rusticyaninu. Gen pro rusticyanin byl nejprve amplifikován z DNA bakterie Acidithiobacillus ferrooxidans. Následně byl amplifikovaný gen pro rusticyanin upraven pro ligaci do extracelulárního expresního vektoru pPIC9. Poté byl vektor pPIC9 obashující gen pro rusticyanin linearizován pomocí restriktasy SacI a transformován do kvasinky P.pastoris. Po transformaci byl vybrán klon s nejvyšší produkcí rusticyaninu s využitím SDS-PAGE. Tento vybraný klon byl následně použit pro fermentaci. Po produkci rusticyaninu ve fermentoru bylo médium zakoncertováno a přečištěno od solí a nízkomolekulárních látek. Posledním purifik A. ferrooxidans is a chemolithoautotrophic acidophilic bacterium causing acidification of environment. It is often used for the industrial recovery of metals e.g. copper by bioleaching. This bacterium obtains energy by oxidizing ferrous iron or sulphur compounds. Rusticyanin is a blue copper periplasmatic protein capable of transferring electrons involved in respiratory chain. Diploma thesis is focused on the over-expression of recombinant protein rusticyanin. Firstly the gene for rusticyanin was amplified, prepared for a ligation and inserted into extracellular expression vector pPIC9. Consequently pPIC9 vector was linearized by SacI restriction endonuclease and transformed into P. pastoris. After transformation the clone with the highest production of rusticyanin was chosen using SDS-PAGE. Selected clone was used for production of rusticyanin in fermenter when expressed rusticyanin was purified by ion-exchange chromatography on Mono S HR 5/5 column. Rusticyanin with his-tag was prepa |
|---|---|
| Popis jednotky: | Vedoucí práce: Oldřich Janiczek |
| Fyzický popis: | 56 l : il. |