Působení platinového derivátu LA-12 na buněčnou linii HT-29 ve srovnání s cisplatinou a oxaliplatinou
Cílem práce bylo studium účinku LA-12 ve srovnání s cisplatinou a oxaliplatinou na buňky kolorektálního karcinomu HT-29 v různých fázích buněčného růstu. Využili jsme proliferační křivky ke zjištění správné koncentrace buněk pro sledování rezistence závislé na konfluenci po aplikaci LA-12, cisplatin...
Uloženo v:
| Hlavní autor: | |
|---|---|
| Další autoři: | |
| Typ dokumentu: | VŠ práce nebo rukopis |
| Jazyk: | Čeština |
| Vydáno: |
2010
|
| Témata: | |
| On-line přístup: | http://is.muni.cz/th/132378/lf_d/ |
| Shrnutí: | Cílem práce bylo studium účinku LA-12 ve srovnání s cisplatinou a oxaliplatinou na buňky kolorektálního karcinomu HT-29 v různých fázích buněčného růstu. Využili jsme proliferační křivky ke zjištění správné koncentrace buněk pro sledování rezistence závislé na konfluenci po aplikaci LA-12, cisplatiny a oxaliplatiny. Cytotoxicita byla detekována pomocí MTT testu mitochondriální aktivity podporovaným výsledky viability (barvení eosinem) a počtů buněk ve světelném mikroskopu (adherentní, plovoucí). K popisu buněčného cyklu jsme využili průtokovou cytometrii. Apoptózu jsme studovali detekcí procenta buněk s fosfatidyl serinem (annexin-V, flowcytometrie), snižení mitochondriálního potenciálu (TMRE, flowcytomwtrie), kondenzací a fragmentací jaderného chromatinu (DAPI, fluorescenční mikroskopie) a štěpení PARP (westerm blott). LA-12 vykazovala podobnou cytotoxicitu u obou studovaných populací (IC50 konfl. 4,52 µM, IC50 nekonfl. 4,42 µM). U oxaliplatiny byla zjištěna IC50 konfl 112, 56 µM a IC The aim of this study was to investigace effects of LA-12 on colorectal carcinoma cell line HT-29 in comparison to cisplatin and oxaliplatin in other phases of cell growth. Subconfluent and growing population were used to study influence-dependent resistance after treatment with LA-12, cisplatin and oxaliplatin. Cytotoxicity was detected by MTT test of mitochondrial activity followed by viability (eosin) assay and detection of cell numbers (light microscopy- adherent and floating cells). Flowcytometry was used to describe changes in cell cycle. Apoptosis was evaluated as a percentage of cells with phosphatidyl serin (PS) externalization (annexin-V assay, flowcytometry), decrease of MMP (TMRE, flowcytometry), condensation and fragmentation of nuclear chromatine (DAPI staining, fluorescence microscopy) and PARP cleavage (western bloting). LA-12 had similar toxicity in both populations (IC50 confl. 4,52 µM or IC50 nonconfl. 4,42 µM respectively) in contrast to oxaliplatin (IC50 confl 112, |
|---|---|
| Popis jednotky: | Vedoucí práce: Roman Janisch |
| Fyzický popis: | 68 l. |