Optimalizace exprese rekombinantních proteinů v kvasince Pichia pastoris
Expresní systém kvasinky Pichia pastoris se ve velkém měřítku používá na produkci rekombinantních proteinů již několik desetiletí. Pichia pastoris v sobě spojuje výhody eukaryotních i prokaryotních expresních systému. V rámci mé práce byly ve fermentoru produkovány mutantní formy proteinu cryptogein...
Uloženo v:
| Hlavní autor: | |
|---|---|
| Typ dokumentu: | VŠ práce nebo rukopis |
| Jazyk: | Čeština |
| Vydáno: |
2010
|
| Témata: | |
| On-line přístup: | http://is.muni.cz/th/175648/prif_m/ |
| Shrnutí: | Expresní systém kvasinky Pichia pastoris se ve velkém měřítku používá na produkci rekombinantních proteinů již několik desetiletí. Pichia pastoris v sobě spojuje výhody eukaryotních i prokaryotních expresních systému. V rámci mé práce byly ve fermentoru produkovány mutantní formy proteinu cryptogeinu. Cryptogein, malý 10 kDa bazický protein patřící do rodiny elicitinů, je sekretován vysoce patogenní oomycetou Phytophthora cryptogea a vyvolává na rostlinách tabáku hypersenzitivní reakci. Molekula cryptogeinu obsahuje kavitu, do které se mohou vázat steroly a mastné kyseliny, kdy vazba sterolu vyvolává v rámci proteinu strukturní posun v omega smyčce. Z tohoto hlediska cryptogein patří mezi tzv. “sterol přenášející proteiny“. Na základě výsledků z předchozích studií se předpokládá nezbytnost vazby sterolu pro biologickou aktivitu proteinu. V bioreaktoru bylo vyprodukováno a vypurifikováno pět proteinů: X24, L41F, V84F, V84F/L41F a K13V s průměrnými výtěžky 40-60 mg proteinu na litr bazál Expression system Pichia pastoris has been used for decades to production of recombinant proteins in large scale. Pichia pastoris combines the advantages of eukaryotic and prokaryotic expression systems. In my work mutant forms of protein cryptogein were produced in the fermenter. Cryptogein is a small 10 kDa basic protein belongs to the family of elicitins. It is secreted by highly pathogenic oomycetes Phytophthora cryptogea and it triggers on tobacco plants hypersensitivity reaction. Cryptogein molecule contains a cavity, to which sterols and fatty acids can bind to. The binding of sterol evoke structural shift in the omega loop of protein. From this perspective, cryptogein belongs to the so-called "sterol carrying proteins“. Based on previous results we can suppose that binding of sterol is necessary for biological activity. Five proteins: X24, L41F, V84F, V84F/L41F and K13V were produced in the bioreactor and purified with average yields of 40-60 mg protein per liter of basal media |
|---|---|
| Fyzický popis: | 54 l. |