Klonování a exprese proteinu Air2 v Pichia pastoris
Bakalářská práce se zaměřuje na expresi konstruktu proteinu Air2 (5 zinkových domén) v kvasince Pichia pastoris. Protein Air2 je součástí komplexu zvaného TRAMP, jehož funkcí je připojování dlouhých poly(A) konců během procesu kontroly kvality RNA. Tyto konce slouží jako signál pro další supramoleku...
Uloženo v:
| Hlavní autor: | |
|---|---|
| Další autoři: | |
| Typ dokumentu: | VŠ práce nebo rukopis |
| Jazyk: | Čeština |
| Vydáno: |
2009.
|
| Témata: | |
| On-line přístup: | http://is.muni.cz/th/141941/prif_b/ |
| Shrnutí: | Bakalářská práce se zaměřuje na expresi konstruktu proteinu Air2 (5 zinkových domén) v kvasince Pichia pastoris. Protein Air2 je součástí komplexu zvaného TRAMP, jehož funkcí je připojování dlouhých poly(A) konců během procesu kontroly kvality RNA. Tyto konce slouží jako signál pro další supramolekulární komplex zvaný exosom. Protein Air2 je pravděpodobně zodpovědný za rozpoznání vadných molekul a za navázání komplexu TRAMP na vlákno RNA. K tomuto navázání slouží patrně 5 zinkových domén, které jsou součástí exprimovaného konstruktu. Nejdříve byla zkoušena exprese konstruktu proteinu Air2 v bakterii E. coli, protein se však nepodařilo získat v solubilní formě. Proto bylo přikročeno k expresi v eukaryotním organismu - kvasince Pichia pastoris. Výhodou exprese v Pichia pastoris je jednak její pokročilý aparát pro posttranslační úpravy proteinů a dále její schopnost extracelulární exprese, čímž se značně zjednodušuje jejich následná purifikace. Bachelor thesis focuses on the expression of protein construct Air2 in the yeast Pichia pastoris. Air2 is a part of TRAMP complex which function is to add long poly(A) tails during the process of RNA quality control. These poly(A) tails are instrumental in targeting to another supramolecular complex called the exosome. Air2 is probably responsible for the recognition of defective molecules and for the RNA recruitment to the TRAMP complex. RNA binding of Air2 is mediated by five zinc knuckles that are studied in this thesis. First, the expression of protein construct Air2 was tested in bacteria E. coli. However, expressed proteins were repeatedly obtained in insoluble form and protein refolding was unsuccessful. Thereby the eukaryotic organism - yeast Pichia pastoris - was used as an expression system. Gene construct of Air2 was successfully cloned into the vector and its validity was verified via sequencing. |
|---|---|
| Popis jednotky: | Vedoucí práce: Richard Štefl. |
| Fyzický popis: | 57 l. |