Exprese a purifikace poly(A) polymerasy v heterologním systému Pichia Pastoris
Poly(A) polymerasy jsou všeobecně známy jako enzymy zodpovědné za polyadenylaci 3´konce prekurzorové mRNA v jádře eukaryot. Vyskytují se však i v bakteriích, v nichž zastávají naprosto odlišnou fuknci. Polyadenylace nevede ke stabilizaci mRNA, jako je tomu v eukaryotech, ale k degradaci. V posledníc...
Uloženo v:
| Hlavní autor: | |
|---|---|
| Další autoři: | |
| Typ dokumentu: | VŠ práce nebo rukopis |
| Jazyk: | Čeština |
| Vydáno: |
2009.
|
| Témata: | |
| On-line přístup: | http://is.muni.cz/th/211469/prif_b/ |
| Shrnutí: | Poly(A) polymerasy jsou všeobecně známy jako enzymy zodpovědné za polyadenylaci 3´konce prekurzorové mRNA v jádře eukaryot. Vyskytují se však i v bakteriích, v nichž zastávají naprosto odlišnou fuknci. Polyadenylace nevede ke stabilizaci mRNA, jako je tomu v eukaryotech, ale k degradaci. V posledních letech byly v eukaryotech objeveny další poly(A) polymerasy, a to jak v jádře tak v cytoplazmě. Jednou z těchto nově objevených poly(A) polymeras je i protein Trf4, jehož polyadenylační aktivita je nezbytnou součástí procesu kontroly kvality RNA v jádře. Cílem této práce byla exprese a purifikace Trf4 proteinu v heterologním systému Pichia pastoris za účelem získání dostatečného množství proteinu, které by posloužilo ke strukturní analýze. Během práce se však nepodařilo nalézt vhodné expresní podmínky, a tudíž ani získat protein. Poly(A) polymerases are well known as enzymes responsible for polyadenylation of 3´ends of precursore mRNA in nucleus of eukaryotes. However there is also poly(A) polymerase in bacteria which mediates completly different function. Polyadenylation does not stabilize the mRNA like in eukaryotes but determines it for degradation. In last few years new poly(A) polymerases were found in cytoplasm and nucleus of eukaryotes. One of these recently discovered poly(A) polymerases is Trf4 protein which polyadenylation activity is essential in process of RNA quality control in nucleus. The aim of this work was expression and purification of Trf4 protein in heterologous system Pichia pastoris. Obtained protein would have served for purposes of structure analysis. Unfortunately project was not successful because expression conditions were not optimized enough. |
|---|---|
| Popis jednotky: | Vedoucí práce: Štěpánka Vaňáčová. |
| Fyzický popis: | 46 l. |