Mutageneze lektinu RS20L z fytopatogenu Ralstonia solanacearum
Předmětem výzkumu v této bakalářské práci byl lektin RS20L produkovaný bakterií Ralstonia solanacearum, který svou strukturou připomíná galektiny, ale jeho sekvence nevykazuje podobnost s žádnou z doposud známých aminokyselinových sekvencí. Při purifikaci tohoto rekombinantního lektinu na mannan-aga...
Uloženo v:
| Hlavní autor: | |
|---|---|
| Další autoři: | |
| Typ dokumentu: | VŠ práce nebo rukopis |
| Jazyk: | Čeština |
| Vydáno: |
2009.
|
| Témata: | |
| On-line přístup: | http://is.muni.cz/th/211282/prif_b/ |
| Shrnutí: | Předmětem výzkumu v této bakalářské práci byl lektin RS20L produkovaný bakterií Ralstonia solanacearum, který svou strukturou připomíná galektiny, ale jeho sekvence nevykazuje podobnost s žádnou z doposud známých aminokyselinových sekvencí. Při purifikaci tohoto rekombinantního lektinu na mannan-agarosové koloně se setkáváme s faktem, že se mannosa naváže do vazebného místa lektinu, čímž dojde k vytvoření abnormálně stabilního komplexu lektinu s cukrem. Ve snaze obejít tvorbu komplexu se jeví možným řešením připojení histidinové kotvy k N-terminálnímu konci proteinu, aby mohla být provedena jeho purifikace pomocí metody metalochelatační afinitní chromatografie. Řešení tohoto problému bylo obsahem této bakalářské práce. V teoretické části byly charakterizovány základní vlastnosti lektinů a jejich rozdělení podle různých kriterií. V rámci lektinů patogenních organismů byla zvláštní pozornost věnována lektinu RS20L. První část praktické práce, kde bylo cílem zmutovat expresní vektor pRSET. The task of laboratory research in my thesis was lectin RS20L produced by bacterium Ralstonia solanacearum, which resembles galectins in their structure but its sequence is not similar to any up-to-date-known amino acid sequence. Purification of this recombinant lectin on mannose-agarose column shows that mannose binds strongly to the binding place of lectin and thus creates extremely firm lectin-saccharide complex. The way how to overcome complex formation can be in change of purification principle. The new purification approach is based on usage metallochelatic affinity chromatography on Ni-NTA without using mannose. The thesis is focused on solving this problem. In the theoretic part, basic characteristics of lectins were described and their division according to various criteria was specified. Within the lectins of pathogenic organisms special attention was focused on lectin RS20L produced by bacterium R. solanacearum. |
|---|---|
| Popis jednotky: | Vedoucí práce: Michaela Wimmerová. |
| Fyzický popis: | 47 l. |