Studium procesů probíhajících v živých buňkách pomocí mikroskopických fluorescenčních in vivo metod
Náplní této práce bylo studium buněčné lokalizace a vzájemné kolokalizace proteinů AIF, endonukleázy G a AMID, u kterých se předpokládá funkce při apoptóze nezávislé na kaspázách, a zároveň studium jejich předpokládané translokace do jádra v průběhu apoptózy vyvolané proteinkinázovým inhibitorem sta...
Uloženo v:
| Hlavní autor: | |
|---|---|
| Další autoři: | |
| Typ dokumentu: | VŠ práce nebo rukopis |
| Jazyk: | Čeština |
| Vydáno: |
2006.
|
| Témata: | |
| On-line přístup: | http://is.muni.cz/th/63720/prif_m/ |
| Shrnutí: | Náplní této práce bylo studium buněčné lokalizace a vzájemné kolokalizace proteinů AIF, endonukleázy G a AMID, u kterých se předpokládá funkce při apoptóze nezávislé na kaspázách, a zároveň studium jejich předpokládané translokace do jádra v průběhu apoptózy vyvolané proteinkinázovým inhibitorem staurosporinem. K tomuto účelu byly použity moderní metodické přístupy, jako jsou bioinformatická predikce lokalizace proteinu na základě primární struktury, vizualizace buněčných proteinů navázanými fluorescenčními proteiny, fluorescenční mikroskopie živých buněk a softwarová analýza obrazu. Byly navrženy savčí expresní vektory nesoucí geny kódující sledované proteiny připojené k fluorescenčním proteinům EYFP a Hc-Red-tandem. Těmito vektory byly tranzientně i stabilně transfekovány buňky lidské nádorově transformované linie U-2 OS a to jak jednotlivě, tak i dvěma vektory současně. Na základě primární struktury zkoumaných proteinů byla softwarově odhadnuta jejich buněčná lokalizace. Byla zave. The purpose of this thesis was to study the cellular localization and co-localization of proteins AIF, endonuclease G and AMID, which are thought to be involved in caspase-independent apoptosis, as well as to study their assumed translocation into the nucleus during apoptosis induced by the proteinkinase inhibitor staurosporine. We used modern methods, such as primary structure-based bioinformatical prediction of the protein localization, visualisation of cellular proteins through their fusion to fluorescent proteins, living cell fluorescent microscopy and software image analysis. We designed mammalian expression vectors, which carry genes encoding the proteins of interest fused to fluorescent proteins. We managed to transfect human U-2 OS cancer cells both tranziently and stably, as well as to co-transfect them with two expression vectors at once. We predicted the cellular localization of the proteins of interest using software, which analyses the aminoacid sequence of the protein. We. |
|---|---|
| Popis jednotky: | Vedoucí práce: Miroslav Vařecha. |
| Fyzický popis: | 74 l. |