Analýza buněčných antigenů u leukémií - ROR1 a COBLL1 u chronické lymfocytární leukémie - Plešingerová, Hana; Doubek, Michael, 1972-; Masarykova univerzita. Interní hematoonkologická klinika (2018)
Úvod: Chronická lymfocytární leukémie (CLL) je maligní onemocnění B lymfocytů, jejichž přežití závisí na signálech poskytovaných mikroprostředím. Maligní B lymfocyty se odlišují od zdravých povrchovou expresí tyrozin kinázy ROR1, která aktivuje signální dráhu Wnt/PCP (planar cell polarity) regulující migraci buněk CLL. Prognóza pacientů s CLL je značně variabilní a určuje se zejména dle přítomnosti somatických hypermutací v IGHV (variabilní oblast těžkého řetězce imunoglobulinu) a aberací v genu TP53 (delece či mutace). Cílem práce bylo potvrdit vazbu ROR1 a jeho nově identifikovaného partnera COBLL1 a vyšetřit vztah exprese genu COBLL1 k prognóze pacientů s CLL a chování maligních buněk. Metody: Vazby proteinů byly analyzovány za použití transfekce buněk HEK293 vektory kódujícími COBLL1 a ROR1 a následné imunoprecipitace a imunofluorescenčního barvení. Exprese byla hodnocena kvantitativní RT-PCR a westernovým přenosem. Celkové přežití pacientů (OS) a jejich čas do první a druhé terapie byla porovnávány dle Kaplan-Meierových křivek.
Introduction: Chronic lymphocytic leukaemia (CLL) is a disease of malignant B cells dependent on microenvironmenal stimuli. Malignant B lymphocytes differ from healthy B lymphocytes in surface expression of ROR1 - a tyrosine kinase activating signalling Wnt/PCP (planar cell polarity) pathway, which regulates CLL cell migration. To determine heterogeneous prognosis of CLL patients, IGHV SHM status (presence of somatic hypermutation in immunoglobulin heavy chain variable region) and TP53 aberrations (deletion or mutation) are tested. The aim of this thesis was to confirm interaction between ROR1 and its newly identified binding partner COBLL1 and to examine COBLL1 gene expression in relation to CLL patients’ prognosis and CLL cell behaviour. Methods: To analyse protein interactions, HEK293 cells were transfected with vectors coding COBLL1 and ROR1 and subsequently submitted to immunoprecipitation and immunofluorescence staining. The expression was evaluated using qRT-PCR and western blotting.
Vedoucí práce: Michael Doubek
Dizertace (Ph.D.)--Masarykova univerzita, Lékařská fakulta, 2018
Keywords: antigeny; COBLL1; chemotaxe; chronická lymfatická leukemie; ROR1; signální transdukce; Antigens; Chemotaxis; Leukemia, Lymphocytic, Chronic, B-Cell; Signal Transduction; disertace; dissertations