Charakterizace protilátek vyvinutých pro detekci cytokininového receptoru AHK4 - Svozilová, Hana; Pekárová, Blanka; Masarykova univerzita. Ústav experimentální biologie (2017)
Cytokininy jsou fytohormony, které regulují rostlinný růst a vývoj. Genom Arabidopsis thaliana kóduje tři cytokinové receptory, ARABIDOPSIS HISTIDINE KINASE 2 (AHK2), AHK3 a AHK4, jejichž subcelulární lokalizace je dodnes předmětem zájmu mnoha vědeckých pracovišť. Receptory jsou v buňce lokalizovány na plazmatické membráně a na membráně endoplazmatického retikula. Membránová topologie však není známá. Protilátky dostatečně citlivé a specifické rozpoznat jednotlivé receptory by byly cenným nástrojem pro studium jejich exprese, intracelulární lokalizace a funkční charakterizace. Cílem této diplomové práce bylo charakterizovat 4 polyklonální a 2 monoklonální protilátky vyvinuté pro imunodetekci AHK4 receptoru. Jako imunogeny byly použity purifikovaný protein C-terminální přijímačové domény AHK4 a syntetický peptid z extracelulární domény AHK4. Protilátky vyvinuté proti přijímačové doméně byly schopny in vitro detekovat 1 ng tohoto purifikovaného proteinu. V bakteriálních lyzátech polyklon
Cytokinins are phytohormones that control many aspects of plant growth and development. Genome of Arabidopsis thaliana encodes three cytokinin receptors, ARABIDOPSIS HISTIDINE KINASE 2 (AHK2), AHK3 and AHK4, whose subcellular localization is still being studied. Cytokinin receptors have been found to be localized to the endoplasmic reticulum as well as plasma membrane. However, the membrane topology remains unknown. Thus, antibodies specifically recognizing individual receptors would be valuable for studying their tissue and cell type-specific expression, the intracellular localization and characterization. The aim of this thesis was to characterize 4 polyclonal and 2 monoclonal antibodies developed for immunodetection of AHK4 receptor. The immunogens used for immunization were C-terminal receiver domain of AHK4 and synthetic peptide from extracellular domain of AHK4. Antibodies developed against receiver domain were able to detect 1 ng of this purified protein. Using crude bacterial l
Vedoucí práce: Blanka Pekárová
Diplomová práce (Mgr.)--Masarykova univerzita, Přírodovědecká fakulta, 2017
Keywords: AHK4; cytokininy; histidinkinasa; imunodetekce; protilátky; receptory cytokinové; antibodies; immunodetection; Cytokinins; Histidine Kinase; Receptors, Cytokine; diplomové práce; master's theses