Rozpoznání DNA modifikované fluorescenčními značkami a reaktivními funkčními skupinami specifickými proteiny - Langer, Martin; Fojta, Miroslav, 1967-; Masarykova univerzita. Ústav biochemie (2016)
Fluorescenční metody obecně představují efektivní způsob studia biologických procesů. Terminální fluorescenční značení DNA patří k běžným technikám využívaným pro sledování DNA-protein interakcí. Naproti tomu nový potenciál pro sledování těchto interakcí nabízí cílená příprava DNA modifikované vhodnými fluorescenčními značkami. V rámci diplomové práce byly připraveny specifické modifikované DNA, a to enzymatickou inkorporací 2‘-deoxyribonukleosid trifosfátů (dNTPs) nesoucí modifikaci v podobě speciálních typů fluorescenčních značek citlivých ke svému blízkému okolí. Cílem modifikace DNA byla příprava vhodných prób pro sledování interakcí nádorového supresorového proteinu p53 s těmito modifikovanými DNA. Byly sledovány jak samotné fluorescenční vlastnosti připravených modifikovaných DNA, tak i využití fluorescence pro vazebné experimenty s různými konstrukty proteinu p53. Vzájemná interakce proteinů p53 s modifikovanou DNA byla následně testována i pomocí metody EMSA. Na základě získaný
Fluorescence methods generally represent an effective way to study biological processes. Terminal fluorescent labeling of DNA is one of the conventional techniques used for monitoring protein-DNA interactions. On the other hand, there is a potential for monitoring these interactions offered by methodic approaches of targeted synthesis of DNA modified by suitable fluorescent labels. Within this thesis the specific modified DNAs were prepared by enzymatic incorporation of 2'-deoxyribonucleoside triphosphates (dNTPs) carrying a modification in the form of special types of fluorescent markers sensitive to its close surroundings. The aim of the modification was to prepare suitable DNA probes for monitoring the interactions of the tumor suppressor protein p53 with the modified DNA. Both the fluorescent properties of the prepared modified DNA and the fluorescence utillization in binding experiments with different variants of the p53 protein were monitored. Mutual interaction of p53 with DNA w
Vedoucí práce: Miroslav Fojta
Diplomová práce (Mgr.)--Masarykova univerzita, Přírodovědecká fakulta, 2016
Keywords: bílkoviny; fluorescenční diagnostika; fluorofor; protein p53; fluorophore; fluoroscence diagnostics; proteins; diplomové práce; master's theses