Rekonstituce CRISPR/Cas9 nukleázy in vitro - Tučková, Kristýna (2016)
V této bakalářské práci se věnujeme mechanismům působení CRISPR/Cas9 nukleázy, jejímu využití v modifikaci genů a modulaci genové exprese. Cílem bakalářské práce bylo vytvoření dvou aktivních komplexů CRISPR/Cas9 nukleázy s využitím dvou různých sgRNA a porovnání efektivity těchto dvou komplexů. SgRNA byly získány transkripcí DNA templátu, který byl připraven annealingem oligonukleotidů nebo linearizací plazmidu obsahujícího inzert DNA o určité sekvenci. Tyto dva způsoby přípravy se výrazně liší ve své časové a finanční náročnosti. Následně byla porovnávána účinnost obou sgRNA. Bylo zjištěno, že sgRNA z oligonukleotidů vykazovala vyšší efektivitu štěpení DNA substrátu.