Optimalizace TR-FRET stanovení intracelulárního cAMP v lidských neutrofilech ovlivněných forskolinem a jeho deriváty - Hronová, Adéla (2016)
Tato práce se zabývá optimalizací stanovení intracelulárního cyklického AMP (cAMP) metodou TR-FRET v lidských neutrofilech, ve kterých koncentrace cAMP moduluje jejich antimikrobiální procesy zahrnující adhezi, chemotaxi a oxidační vzplanutí. cAMP je v buňkách tvořen z ATP enzymem adenylylcyklázou (AC) a jedná se o významného sekundárního posla v buněčné signalizaci. Aktivita AC je stimulována forskolinem a jeho deriváty. Metoda TR-FRET je založena na kompetici mezi cAMP značeným chelátem europia a cAMP ve zkoumaném vzorku o vazebné místo na cAMP specifických monoklonálních protilátkách značených Ulight barvivem. V experimentální části byl testován vhodný počet buněk pro měření cAMP, vliv média s Ca2+ a účinnost forskolinu, colforsinu, 7-deacetyl-forskolinu (7DA-FSK) a 1,9-dideoxy-forskolinu (dd-FSK) na stimulaci produkce cAMP. Z výsledků vyplývá, že forskolin a colforsin mají srovnatelný účinek na aktivaci AC neutrofilů, zatímco 7DA-FSK má nižší a dd-FSK téměř žádný účinek na modulaci