Mechanismus odpovědi na hypoxii u embryonálních kmenových buněk /
Tato práce se zabývá studiem mechanismu odpovědi myších embryonálních kmenových buněk na hypoxii. Ke studiu byl využitý model, který se snaží s pomocí farmakologických látek simulovat v normoxii stav buněk typický pro nedostatek kyslíku. To obnáší stabilizaci faktoru indukovaného hypoxií, který je p...
Uloženo v:
| Hlavní autor: | |
|---|---|
| Další autoři: | |
| Typ dokumentu: | VŠ práce nebo rukopis |
| Jazyk: | Čeština |
| Vydáno: |
2014
|
| Témata: | |
| On-line přístup: | http://is.muni.cz/th/356419/prif_m/ |
| Shrnutí: | Tato práce se zabývá studiem mechanismu odpovědi myších embryonálních kmenových buněk na hypoxii. Ke studiu byl využitý model, který se snaží s pomocí farmakologických látek simulovat v normoxii stav buněk typický pro nedostatek kyslíku. To obnáší stabilizaci faktoru indukovaného hypoxií, který je považován za klíčovou složku odpovědi na hypoxii a který spouští transkripci řady genů souvisejících s adaptací na nedostatek kyslíku. Dále pak dodání nebo indukci tvorby reaktivních metabolitů kyslíku, jejichž působení během hypoxie je také velice diskutováno. Zájem byl kladen na pozorování změn v signálních drahách významných pro zachování typických vlastností myších embryonálních kmenových buněk. Ke stanovení snášenlivosti používaných látek byla použita ATPázová assay. Pro detekci přítomnosti reaktivních metabolitů kyslíku v buňkách byla použita fluorescenčně značená sonda a následné stanovení na průtokovém cytometru. K detekci stabilizace hypoxií indukovaného faktoru a fosforylací molekul studovaných signálních drah byla použita metoda western blot. In this thesis we study mechanism of response of mouse embryonic stem cells to hypoxia. To simulate hypoxic state of cells under normoxic conditions we have used a farmacological model, which includes stabilization of hypoxia-inducible factor, the key regulator in cell response to hypoxia, by mimetics. HIF is transcriptional factor which triggers transcription of many genes, responsible for adaptation to oxygen deficiency. The role of reactive oxygen species during hypoxia is also discussed. We used exogenic and endogenic sources of reactive oxygen species. We tested an influence of HIF, ROS and their combination on cell signalling. We focused on monitoring of changes in signalling pathways, important for pluripotency and self-renewal of mouse embryonic stem cells. ATPase assay was used for testing viability of cells after treatment with drugs. Production of reactive oxygen species was detected by flow cytometry. Western blot was used for detection of stabilization of hypoxia-inducible factor-1alfa and fosforylations of studied molecules. |
|---|---|
| Popis jednotky: | Vedoucí práce: Jiří Pacherník |
| Fyzický popis: | 94 listů |