Využití cirkulující mRNA pro diagnostiku karcinomu prostaty - Balvan, Jan (2013)
Detekce sérové mRNA poutá v posledních letech značnou pozornost zejména díky jejímu potenciálnímu využití v roli markerů různých onemocnění. Streptavidinem-modifikované paramagnetické mikročástice částice (SMPs) jsou díky jejich možnému automatizovanému použití a vysoké účinnosti zajímavou technikou izolace cirkulujících nukleových kyselin. Cílem této práce bylo optimalizovat protokol izolace mRNA ze séra pacientů s použitím redukovaných objemů reakčních složek a vzorků séra. Byly optimalizovány následující faktory: Množství paramagnetických mikročástic, sondy oligo(dT)20 a séra. Optimalizovali jsme také posloupnost jednotlivých kroků procedury. Měřili jsme množství RNA získané jednotlivými metodami a expresi metalothioneinu 2A, potenciálního nádorového markeru. Zjistili jsme, že izolace RNA je možná z velmi malých objemů séra (10-200 μL) bez ovlivnění účinnosti a čistoty. Množství SMPs může být redukováno až na 5 μL s optimální účinností v rozmezí 10 - 30 μL SMPs. Objem sondy oligo(