Příprava a charakterizace polyklonálních protilátek proti pod-jednotkám pozitivních elongačních faktorů - Sklenářová, Martina; Kohoutek, Jiří, 1976-; Masarykova univerzita. Přírodovědecká fakulta (2013)
V této diplomové práci se věnuji testování polyklonálních protilátek z králičích sér (CDK13-C, CDK13-N, CycK-1-61) a kozího séra (CDK13-532) pro metody Western blot, imunoprecipitace, nepřímé imunofluorescence a imunohistochemie. Tato polyklonální séra byla připravena proti cyklinu K a kináze CDK13. Důvodem byl fakt, že v období zadání diplomové práce, nebyly komerčně dostupné protilátky proti cycklinu K a CDK13. Proteiny cyklin K a CDK13 obecně hrájí klíčovou roli v regulaci elongační fáze eukaryotické transkripce, která se zdá být zcela zásadním kontrolním bodem v procesu eukaryotické transkripce. Vlastní charakterizace sér byla provedena jak na lidských buňkách HCT116, U2OS tak i myších kmenových buňkách R1. Ukázala jsem, že séra pro CDK13 se dají využít k detekci proteinové hladiny a k precipitaci endogenní CDK13 v lidských a myších buňkách. Dále jsme prokázala, že sérum CycK-1-61 není vhodné pro detekci proteinové hladiny cyklinu K v lidských a myších buňkách, ale dá se použít k p
This thesis is focused on testing the polyclonal antibodies from rabbit sera (C-CDK13, CDK13-N-CycK 1-61) and goat serum (CDK13-532) in use of Western blot, immunoprecipitation, indirect immunofluorescence and immunohistochemistry. The polyclonal sera were prepared against cyclin K and kinase CDK13. The reason was the fact that at the beginning the diploma work, there were not commercially available antibodies against cycklin K and CDK13. Proteins cyclin K and CDK13 generally play a key role in the regulation of eukaryotic transcription elongation phase, which seems to be quite a major control point in the process of eukaryotic transcription. Own characterization of sera was performed on both human HCT116 cells, U2OS and mouse stem cells R1. I showed that the serum for CDK13 can be used to detect protein levels and precipitation of endogenous CDK13 in human and murine cells. Furthermore, we demonstrated that serum CycK-1-61 is suitable for the detection of protein levels of cyclin K in
Vedoucí práce: Jiří Kohoutek
Diplomová práce (Mgr.)--Masarykova univerzita, Přírodovědecká fakulta, 2013
Keywords: diplomové práce; Blotting, Western; Cyclin-Dependent Kinases; Immunoprecipitation; western blotting; cyklin-dependentní kinasy; imunochemie; imunoprecipitace; polyklonální protilátky; protilátky; P-TEFb; antibodies; antibodies; immunochemistry