Studium reaktivace vybraných p53 mutantů u B-buněčných nádorových linií - Jašková, Zuzana (2012)
Mutácie a/alebo delécie v géne TP53 sa objavujú u asi 10 - 15 % pacientov s hematologickými malignitami. Ich prítomnosť vedie k veľmi zlej prognóze, takmer vždy vyžadujúcej nevyhnutnosť terapie a napriek tomu k veľmi krátkej dobe prežívania. Predmetom diplomovej práce je štúdium reaktivácie vybraných p53 mutantov v bunkách nádorových línií (RAJI, RAMOS, SU-DHL-4) prostredníctvom komerčne dostupných experimentálnych látok (PRIMA-1, elipticín) schopných meniť mutovanú konformáciu proteínu p53 na funkčnú. Predpokladá sa, že v prípade úspešnej obnovy štandardnej funkcie mutovaného proteínu dôjde k zníženiu hladiny p53 v bunkách a následne k indukcii expresie cieľových génov p53, napríklad PUMA, BAX, a CDKN1A. Diplomová práca preto metodicky zahŕňala najmä prácu s tkanivovými kultúrami leukemických a lymfómových buniek, vrátane ich ošetrovania testovanými látkami, analýzy metabolickej aktivity (WST-1), westernový prenos, imunoprecipitáciu a kvantitatívnu polymerázovú reťazovú reakciu v reállnom čase. Vo výsledku „malé molekuly“ (PRIMA-1, elipticín) viedli v niektorých prípadoch ku koncentračne závislému zníženiu hladiny mutovaného proteínu p53. V iných prípadoch zase došlo ku koncentračne závislej indukcii génov CDKN1A a BAX, teda génov regulovaných proteínom p53. Toto s veľkou pravdepodobnosťou preukazuje schopnosť týchto molekúl reaktivovať vybraných p53 mutantov. Účinky týchto molekúl na nádorové bunky s ďalšími mutáciami proteínu p53 budú predmetom nadväzujúceho štúdia, rovnako ako hodnotenie ich účinku v kombinácii s chemoterapeutikami.