Vývoj stabilně transfekovaných buněčných linií lidských embryonálních kmenových buněk - Markusová, Veronika; Kyrylenko, Sergiy; Masarykova univerzita. Ústav experimentální biologie (2012)
Lidské embryonální kmenové buňky představují velký příslib pro budoucnost medicíny. Jejich rutinnímu použití však brání řada překážek, z nichž některé může pomoci překonat tvorba geneticky modifikovaných lidských embryonálních kmenových buněk. V této diplomové práci se zabývám problematikou stabilní transfekce a tvorbou stabilně transfekované linie hESCs, které by sloužily jako buněčný model pro studium funkce FGF-2. Testovala jsem různé transfekční metody (nukleofekce, lipofekci a nelipozomální transfekční reagenty). Nejvhodnější metodou byl FuGENE HD. Pro stabilní transfekci jsem vybrala plazmidy a DNA fragmenty, které inducibilně exprimují gen zájmu. K tomuto účelu sloužil Tet-On Advanced Inducible Gene Expression System. DNA konstrukty, které jsem připravila, nesou geny pro různé izoformy fibroblastového růstového faktoru 2.
Human embryonic stem cells have great promise for the future of medicine. Their routine use is hampered by many obstacles, some of them could be fixed by the creation of genetically modified human embryonic stem cells. In this thesis I focus on stable transfection and on creating stably transfected lines of hESCs. This could be useful as a model for studying the cellular function of FGF-2. I have tested different transfection methods (nucleofection, lipofection and non-lipozomal transfection reagents). The best method was FuGENE HD. For stable transfection I chose plasmids and DNA fragments to inducibly express the gene of interest. For this purpose I used the Tet-On Advanced Inducible Gene Expression System. The DNA constructs which I prepared contain genes for different isoforms of FGF-2.
Vedoucí práce: Sergiy Kyrylenko
Diplomová práce (Mgr.)--Masarykova univerzita, Přírodovědecká fakulta, 2012
Keywords: embryonální kmenové buňky; fibroblastový růstový faktor 2; transfekce; embryonic stem cells; transfection; Fibroblast Growth Factor 2; diplomové práce; master's theses