Quantitative analysis of interactions of human telomeric proteins - Pavloušková, Jana (2012)
Telomery jsou nukleoproteinové struktury nacházející se na koncích chromozomů. Telomery chrání konce chromozomů před jejich rozpoznáním jako dvouřetězcových zlomů DNA vysoce citlivými opravnými mechanismy buňky. Prostorová struktura a tvar telomerové DNA je určována multiproteinovým komplexem nazývaným Shelterin. Shelterin se skládá ze šesti proteinů. Tři proteiny se přímo vážou na telomerickou DNA (TRF1, TRF2 a POT1) a jsou propojeny do plně funkčního komplexu třemi dalšími proteiny (TIN2, TPP1 a RAP1). Tato práce se zabývá studiem proteinu TIN2 a jeho vlivu na vazebnou afinitu proteinu TRF2 k telomerické DNA. Gen proteinu TIN2 byl klonován do několika bakteriálních vektorů z důvodu optimalizace jeho exprese. Protein TIN2 byl exprimován v E. coli a purifikován metaloafinitní chromatografií. Vliv proteinu TIN2 na vazebnou afinitu proteinu TRF2 k telomerické DNA byl určen za použití měření anizotropie fluorescence. Bylo zjištěno, že přítomnost proteinu TIN2 zvyšuje dvakrát vazebnou afin