Klonování a charakterizace glykosyltransferas z lidského patogenu Aspergillus fumigatus - Fleková, Andrea (2011)
Předložená práce je zaměřena na studium glykosyltransferas, konkrétně na β-1,4-mannosyltransferasu z lidského patogenu A. fumigatus. GTs se významně podílejí na stavbě buněčné stěny patogenních organismů a tím i na jejich virulenci. Proto je získání informací o těchto enzymech velmi důležité. Příprava GTs je velmi obtížná, protože se téměř vždy jedná o transmembránové proteiny, je tedy nutné optimalizovat podmínky pro jejich přípravu. Práce je zaměřena na β-1,4-mannosyltransferasu (Alg1) a její katalytickou doménu. Oba geny byly vklonovány do vektoru pET29b. Celý protein Alg1 se nepodařilo připravit, přestože byly vyzkoušeny různé podmínky optimalizace. Katalytická doména proteinu Alg1 byla po optimalizaci připravena v buněčném kmenu E. coli BL21 (DE3). Téměř všechen cílový protein byl produkován do nerozpustných inkluzních tělísek, proto byla snaha purifikovat katalytickou doménu proteinu Alg1 za denaturačních podmínek. Vyzkoušeny byly také nativní podmínky pro purifikaci, protože