Klonování, exprese a purifikace lidského proteinu ZCCHC7 - Škerle, Jan (2011)
Zinkový protein ZCCHC7 je lidským homologem kvasinkového proteinu Air2 a patrně se stejně jako on podílí na kontrole kvality RNA. Konkrétně je protein Air2 jako jedna z podjednotek multiproteinového komplexu TRAMP zodpovědný za vazbu k RNA. Cílem této práce bylo vyřešit strukturu proteinu ZCCHC7 (jeho 5 zinkových domén) pomocí NMR a prostudovat jeho vazebné schopnosti s RNA. Zvolený konstrukt ZCCHC7 (5Zn domén) byl úspěšné klonován do expresního vektoru pSMT3, tento vektor byl transformován do buněk BL21 CodonPlus (DE3) RIPL. Protein ZCCHC7 (5Zn domén) byl exprimován v konjugaci se solubilní značkou SMT3. Postupně byly optimalizovány jak podmínky pro kultivaci, tak složení lyzačního, promývacího a elučního pufru. Solubilní značka byla odštěpena proteinasou Ulp1, v průběhu experimentu se však nepodařilo nalézt optimální podmínky pro oddělení studovaného proteinu od solubilní značky SMT3. Vzhledem k tomuto problému se studovaný protein nepodařilo získat v dostatečném množství a čistotě