Characterization of the functional domains of the Trf4 protein - Sárazová, Marie (2011)
Trf4p je nekanonická poly(A)-polymerasa, která je katalytickou podjednotkou polyadenylačního komplexu zvaného TRAMP. Komplex TRAMP spolupracuje s nukleasovým komplexem exozom a hraje zásadní roli při kontrole kvality RNA v jádře kvasinek Saccharomyces cerevisiae. Katalytické jádro proteinu Trf4, které se skládá z katalytické a centrální domény, je poměrně dobře prozkoumané, avšak úloha N- a C-koncových částí proteinu je dosud neznámá. V první části práce je popsána systematická charakterizace koncových oblastí proteinu Trf4. Bylo vytvořeno několik zkrácených a bodově mutantních forem genu TRF4 a jejich funkce byla studována jak pomocí in vivo, tak in vitro přístupů. Předběžné výsledky naznačují, že katalytický mechanismus proteinu Trf4 je shodný se strukturně příbuznou poly(A)-polymerasou Pap1p. Druhá část práce je zaměřena na úlohu komplexu TRAMP při kontrole kvality zrání ribozomů. Prekurzory malé ribozomální podjednotky byly izolovány z kvasinek, ze kterých byly odstraněny obě možné