Příprava rekombinantního proteinu AFL1 v kvasinkách - Kunová, Veronika (2011)
Na našem pracovišti bylo již v minulosti provedeno několik experimentů s lektiny z plísně Aspergillus fumigatus. Samotný gen afl1 byl klonovacími procesy vnesen do plasmidu, který byl následně natransformován do buněk Escherichia coli. Cílem bakalářské práce bylo pokusit se připravit vhodný konstrukt obsahující gen afl1, tak aby bylo možno produkovat rekombinantní protein AFL1 v eukaryotickém systému kvasinky Pichia pastoris. Byla ověřena přítomnost cílového genu ve vstupním materiálu a následně byl tento gen namnožen pomocí polymerasové řetězové reakce pomocí k tomu určených primerů. Reakce proběhla opakovaně úspěšně. Takto získaná DNA byla podrobena štěpení pomocí restrikčních endonukleas, stejně jako cílový plasmid pPICZaA. První pokusy o následnou ligaci vedoucí k přípravě konstruktu byly neuspokojující, a proto byly dále optimalizovány. Byla optimalizována čistota vstupní DNA, složení ligační směsi a proces transformace. Z hlediska čistoty vstupní DNA bylo využito přečištění DNA z