Metody imobilizace proteinů na povrch mikrotitračních destiček - Riegelová, Kristýna; Skládal, Petr, 1964-; Masarykova univerzita. Ústav biochemie (2009)
Cílem této bakalářské práce bylo porovnat klasickou pasivní adsorbci s kovalentní imobilizací proteinů na povrch různých mikrotitračních destiček a stripů. Dále byla porovnána vazba na povrch destičky potažený streptavidinem pro vazbu biotinylovaných molekul. Jako protilátka byla použita monoklonální protilátka AL01, albumin lidského séra a anti albumin. Nejprve bylo nutné protilátku naimobilizovat na povrch destiček. Protilátka byla zředěna karbonátovým pufrem na koncentrace 5 μg/ml a 20 μg/ml. Po inkubaci byla přidána enzymem značená sekundární protilátka IgG-HRP a HSA-HRP, která se navázala na protilátku. Množství navázaného konjugátu je pro tento test nejdůležitější. Peroxidáza byla kvantifikována přidáním 3,5,3‘,5‘-tetramethylbenzidinu jako substrátu s peroxidem vodíku. Enzymová reakce byla zastavena 2,5 M HCl a absorbance byla měřena při 450 nm. Absorbance je přímo úměrná množství navázaného konjugátu.
A target of this bachelor thesis was comparison of a classical passive coupling with covalent bonding of proteins on a surface of different microtiter plates and strips. The streptavidin coated plates was tested, this surface couples biotinylated molecules. The model interaction was represented by human serum albumin and anti albumin monoclonal antibody AL01. At first it was necessary to imobilize the antibody AL01 to the surface of microwells. Antibody was diluted in coating buffer at two different concentrations, 5 μg/ml and 20 μg/ml. Subsequently, after incubation and washing, enzym linked secondary antibody IgG-HRP or HSA-HRP conjugate was added, which was coupled to the primary antibody. Quantity of binding conjugate was the most important for this immunoassay. The surface-bound peroxidase was quantified using 3,5,3‘,5‘-tetramethylbenzidine as substrate with hydrogen peroxide. The enzym reaction was stopped by 2,5 M HCl and absorbance was measured at 450nm.
Vedoucí práce: Petr Skládal.
Bakalářská práce (Bc.)--Masarykova univerzita, Přírodovědecká fakulta, 2009.
Keywords: antigeny; ELISA; imobilizace; mikrotitrační destička; protilátky; antibodies; antigens; bakalářské práce