Metody imobilizace proteinů na povrch mikrotitračních destiček - Riegelová, Kristýna (2009)
Cílem této bakalářské práce bylo porovnat klasickou pasivní adsorbci s kovalentní imobilizací proteinů na povrch různých mikrotitračních destiček a stripů. Dále byla porovnána vazba na povrch destičky potažený streptavidinem pro vazbu biotinylovaných molekul. Jako protilátka byla použita monoklonální protilátka AL01, albumin lidského séra a anti albumin. Nejprve bylo nutné protilátku naimobilizovat na povrch destiček. Protilátka byla zředěna karbonátovým pufrem na koncentrace 5 μg/ml a 20 μg/ml. Po inkubaci byla přidána enzymem značená sekundární protilátka IgG-HRP a HSA-HRP, která se navázala na protilátku. Množství navázaného konjugátu je pro tento test nejdůležitější. Peroxidáza byla kvantifikována přidáním 3,5,3‘,5‘-tetramethylbenzidinu jako substrátu s peroxidem vodíku. Enzymová reakce byla zastavena 2,5 M HCl a absorbance byla měřena při 450 nm. Absorbance je přímo úměrná množství navázaného konjugátu.