Mutageneze jako nástroj pochopení afinity a specifity lektinů z patogenních mikroorganismů
Tato práce byla zaměřena na řízenou evoluci lektinu PA-IIL pomocí in vitro náhodné mutageneze. Řízená evoluce je účinným nástrojem široce používaným pro objasňování vztahů mezi proteinovou sekvencí, strukturou a funkcí a také pro produkci proteinů s pozměněnými nebo vylepšenými vlastnostmi. Nejúčinn...
Uloženo v:
| Hlavní autor: | |
|---|---|
| Další autoři: | |
| Typ dokumentu: | VŠ práce nebo rukopis |
| Jazyk: | Čeština |
| Vydáno: |
2009.
|
| Témata: | |
| On-line přístup: | http://is.muni.cz/th/150819/prif_m/ |
| Shrnutí: | Tato práce byla zaměřena na řízenou evoluci lektinu PA-IIL pomocí in vitro náhodné mutageneze. Řízená evoluce je účinným nástrojem široce používaným pro objasňování vztahů mezi proteinovou sekvencí, strukturou a funkcí a také pro produkci proteinů s pozměněnými nebo vylepšenými vlastnostmi. Nejúčinnějším přístupem řízené evoluce je náhodná mutageneze, která zahrnuje mnoho metod používaných pro přípravu knihoven mutantů. Jednou z těchto metod je i error-prone PCR. Cílovým genem, který byl vybrán pro modifikaci pomocí náhodné mutageneze, byl lecB kódující lektin PA-IIL. Tento rozpustný protein pocházející z Pseudomonas aeruginosa je dobře charakterizován a nesporné, že vykazuje neobvykle vysokou afinitu pro monosacharidy vyskytující se ve velké míře jako terminální rezidua buněčných povrchových glykokonjugátů. Náhodná mutageneze by měla sloužit k přípravě proteinů se zajímavě pozměněnou specifitou a afinitou. This work was focused on directed evolution of the gene coding PA-IIL lectin by in vitro random mutagenesis. Directed evolution is a powerful tool widely used for elucidating the relationship between protein sequence, structure and function and also for producing proteins with altered or improved properties. The most useful approach in directed evolution is a random mutagenesis, which includes a lot of methods used to create diverse mutant libraries. One of these methods is error-prone PCR. LecB is the target gene we have modified via random mutagenesis, the gene coding PA-IIL lectin. This Pseudomonas aeruginosa soluble protein has been well-characterized and it is indisputable that it displays an unusually high affinity for monosaccharides widely occurring as terminal residues in cell surface glycoconjugates. The random mutagenesis should help us to create a protein with interestingly modified specificity and affinity. |
|---|---|
| Popis jednotky: | Vedoucí práce: Michaela Wimmerová. |
| Fyzický popis: | 75 l. |