Charakterizace fosfoproteinů hmotnostní spektrometrií
Cílem této práce byla charakterizace fosforylovaných proteinů a studium postupů jejich extrakce a analýzy po proteolytickém štěpení. Jako modelový protein byl zvolen rekombinantní lidský histon 4. Vzorek indukovaných leukemických kuřecích buněk byl obdržen z biologické sekce ústavu experimentální bi...
Uloženo v:
| Hlavní autor: | |
|---|---|
| Další autoři: | |
| Typ dokumentu: | VŠ práce nebo rukopis |
| Jazyk: | Čeština |
| Vydáno: |
2009.
|
| Témata: | |
| On-line přístup: | http://is.muni.cz/th/151266/prif_m/ |
| Shrnutí: | Cílem této práce byla charakterizace fosforylovaných proteinů a studium postupů jejich extrakce a analýzy po proteolytickém štěpení. Jako modelový protein byl zvolen rekombinantní lidský histon 4. Vzorek indukovaných leukemických kuřecích buněk byl obdržen z biologické sekce ústavu experimentální biologie. Analýzy byly provedeny na LC-MS/MS přístroji. Jako nejvhodnější k dalšímu testování se jevila analýza trypsinem štěpených proteinů po extrakci na oxidu titaničitém, zahrnující v sobě separaci vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií přímo spojenou s nano-elektrosprejem jako zdrojem pro hmotnostní analyzátor s možností fragmentace přenosem elektronu. V průběhu práce bylo nalezeno několik fosforylačních míst z části předpověděných na základě podobnosti s jinými organismy. The aim of this work was phosphorylated proteins’ characterization and the study of their extraction and the analysis after proteolytic cleavage. Recombinant human histone 4 was chosen as a model protein. Induced leukemic chicken’s cells sample was obtained from biological section of Department of Experimental biology. Analyses were accomplished by LC-MS/MS instrumentation. Analysis of proteins digested by trypsin after extraction on titanium dioxide, including high performance liquid chromatography separation on-line connected with nano-electrospray ionization as a source for mass spectrometer with possibility of electron transfer dissociation was chosen as the most suitable to another testing. During the work several phosphorylation sites partly predicted due to similarity with other organisms were found. |
|---|---|
| Popis jednotky: | Vedoucí práce: Zbyněk Zdráhal. |
| Fyzický popis: | 55 l., [1] l. příl. |