Molekulární diagnostika bakterií mléčného kvašení rodu Bifidobacterium - Doušková, Dagmar; Rittich, Bohuslav, 1946-; Masarykova univerzita. Ústav experimentální biologie (2007)
Práce byla zaměřena na rodově a druhově specifickou identifikaci 45 nových kmenů bakterií rodu Bifidobacterium izolovaných ze stolice kojenců. Jako kontrola bylo použito 11 typových a sbírkových kmenů. Bakteriální kultury jednotlivých kmenů byly kultivovány na M.R.S. médiu s přídavkem 0,05 % L-cystein hydrochloridu. Z čistých kultur byla DNA izolována metodou lyze buněk, purifikována fenolovou extrakcí a přesrážena 96 % ethanolem. Čistota a koncentrace DNA byly stanoveny spektrofotometricky. Zařazení do rodu Bifidobacterium bylo u 36 kmenů potvrzeno rodově specifickou PCR. Druhová identifikace byla ověřena pomocí PCR s druhově specifickými primery, metodou restrikční analýzy PCR amplionů s využitím 5 restrikčních endonukleáz: AluI, BamHI, Sau3AI, Sau96I, TaqI (ARDRA). Zařazení do druhů bylo ověřováno typizační metodou rep-PCR s primery (GTG)5 a BOXA1R. Z analyzovaného souboru 36 kmenů bylo 7 kmenů zařazeno do druhu B. longum, 21 kmenů do druhu B. infantis, 5 kmenů do druh.
This study was focused on the genus- and species-specific identification of 36 new bifidobacterial strains isolated from stool samples of sucking babies by molecular biological methods. Thirty-six bifidobacterial strains were identified by genus-specific PCR as the Bifidobacterium genus. For the identification to species level, species-specific PCR, DNA restriction analysis (ARDRA) of PCR amplicons, and rep-PCR using 2 primers (GTG)5 and BOXA1R were used, respectively. The 36 strains tested were classified into 4 species of the Bifidobacterium genus; 2 strains were identified as mixed cultures. The intra-specific variability among the analysed strains was found by rep-PCR.
Vedoucí práce: Bohuslav Rittich.
Diplomová práce (Mgr.)--Masarykova univerzita, Přírodovědecká fakulta, 2007.
Keywords: bakterie mléčného kvašení; bifidobakterie; molekulární diagnostika; Bifidobacterium; lactic acid bacteria; molecular diagnostics; diplomové práce; master's theses