Charakterizace telomerových proteinů rostlin - Mozgová, Iva, 1982-; Vrtíková Kubičárová, Tatiana; Masarykova univerzita. Ústav experimentální biologie (2007)
Předkládaná diplomová práce se zabývá charakterizací telomer-vazebných proteinů u rostlin. První část je zaměřena na izolaci a purifikaci telomer-vazebných proteinů z buněčných jader listů Nicotiana tabacum a jejich identifikaci pomocí hmotnostní spektrometrie; druhá část se věnuje telomer-vazebným proteinům Arabidopsis thaliana, klonování, expresi a popisu DNA-vazebných vlastností proteinu AtTRB1 a jeho fragmentů. Proteiny, které se vážou na jednořetězcovou oblast telomer slouží jako ochrana před účinkem nukleáz a ovlivňují přístup telomerázy k telomerám. Vzhledem k jejich rozmanitosti je biochemická izolace převažujícím přístupem při hledání nových ssDNA-vazebných proteinů rostlinných telomer. Pro preparativní účely je vhodnou metodou přečistění jaderného proteinového extraktu iontově výměnná perfuzní chromatografie na silném kationtoměniči při nízkém pH, která může být následně doplněna o afinitní purifikaci. Pro analytické účely je vhodnější omezit množství purifikačních kr.
The presented diploma thesis deals with characterisation of telomere-binding proteins in plants; first part focusing on isolation and purification of telomere-binding proteins from cell nuclei of Nicotiana tabacum leaves, the second being aimed at telomere-binding proteins of Arabidopsis thaliana, the cloning, expression and the description of DNA-binding capability of AtTRB1 and its truncated variants. Telomeric single-strand-DNA-binding proteins serve as a protection against nucleases and regulate the accessibility of telomeres for telomerase. Due to their limited sequence homology, ssDNA-binding proteins are mostly isolated and identified by biochemical methods. This work shows that in preparative amounts, plant nuclear protein extract can be efficiently purified by perfusion chromatography on strong cation exchanger under low pH conditions which can be followed by affinity chromatography. In analytical amounts, however, it is desirable to limit the number of purification step.
Vedoucí práce: Tatiana Vrtíková Kubičárová.
Diplomová práce (Mgr.)--Masarykova univerzita, Přírodovědecká fakulta, 2007.
Keywords: bílkoviny; molekulární biologie; rostliny; telomery; molecular biology; plants; proteins; telomeres; diplomové práce; master's theses