Sledování produkce a vlastností protilátek pomocí biosensorů - Langová, Radka; Skládal, Petr, 1964-; Masarykova univerzita. Ústav biochemie (2006)
Náplní diplomové práce bylo připravit biosensor použitelný pro monitorování připravovaných vzorků monoklonálních protilátek hybridomovou technologií. Nejprve byly vytvořeny dva typy piezoelektrických biosensorů pro stanovení koncentrace IgG ve vzorcích, jednak s imobilizovaným proteinem A a dále s navázanou Ab proti myším IgG. Oba typy sensorů byly použity k sestrojení kalibračních křivek pro stanovení množství IgG v supernatantech tkáňových kultur protilátek připravovaných proti organofosfátům. Obě imobilizace byly provedeny přes cystamin a glutaraldehyd. Tyto sensory byly vhodné pro opakované použití. Regenerace byla prováděna pomocí vodného roztoku glycinu (20 mM, pH 2). Doba jednoho měření nepřesáhla 40 min. Bylo inovováno měřící uspořádání, piezoelektrický biosensor byl spojen s automatickým dávkovačem firmy Gilson, což zjednodušilo měření.
It was report here the development of piezoelectric affinity sensors for antibodies based on the formation of affinity complexes between immobilized either protein A or antimouse IgG and antibodies contained in cell culture supernatants obtained during production of monoclonal antibodies. For both binding reactions protein A and antimouse IgG were immobilized on the surface of the sensor (protein A on the rough and antimouse IgG on the smooth gold area of piezosensor electrodes). Before immobilization, activation of gold electrodes was carried out with cysteamine and glutaraldehyde resulting in formation of a strongly chemisorbed monolayer on the piezosensor surface. During interactions with samples, the change of frequency measured after 600 s of the binding reaction was used as the signal for evaluation. The total time of one analysis was 40 min including binding, dissociation, regeneration and baseline stabilization steps. Analysis with biosensors was compared with classical method ELISA.
Vedoucí práce: Petr Skládal.
Diplomová práce (Mgr.)--Masarykova univerzita, Přírodovědecká fakulta, 2006.
Keywords: bílkoviny; biosenzory; imunoanalýza -- metody; biosensors; immunoassay; proteins; diplomové práce; master's theses